雞蛋白溶菌酶結晶學研究.pdf

1、蛋白質是生命的基礎物質。用X-射線衍射法確定蛋白質的三維結構對生物體進程的理解和指導新型藥物的設計等有十分重要的意義。然而，得到高質量的單晶是當前蛋白質結構確定的瓶頸。雞蛋白溶菌酶(簡稱HEWL)由于其穩(wěn)定性，溶解性和易結晶性，被結晶學家當作研究結晶理論的模板。為了進一步理解蛋白質結晶的理論，我們以HEWL為對象，研究不同的環(huán)境對其結晶行為的影響，通過X-射線衍射在低溫下收集了5種HEWL晶體的數據，并對其結構進行了解析。 通過

2、對HEWL的四方晶體結晶條件的優(yōu)化，我們研究了各種因素對四方HEWL結晶的影響，并確定了pH值和SmCl<,3>是影響結晶的兩個重要因素。 此外，我們發(fā)現了兩個文獻沒有報道過的HEWL結晶條件。在37℃，高濃度的(NH<,4>)<,3>PO<,4>鹽，咪唑鈉緩沖溶液pH 6.1，加入DMSO和Mgcl<,2>混合添加劑，得到了高質量的晶體。添加劑DMSO能夠優(yōu)化晶體生長的形態(tài)。單晶衍射結果表明這可能是雞蛋白溶菌酶的一個新的晶型。

3、它的結構解析還沒有完成。 在37℃下，1.0 M酒石酸鈉，Hepes緩沖溶液，pH 7.5意外得到了四方的HEWL晶體。此晶體的三維結構與HEWL-NaCI一致，空間群都是．P4<,3>2<,1>2。這個結果否定了之前報道的HEWL在25℃以上任何條件下都會以穩(wěn)定的正交晶型結晶的結論。 用大量的金屬氯化物代替氯化鈉的方法，我們得到了系列與金屬共結晶的HEWL晶體。從HEWL-NaCI，HEWL-CuCl<,2>，HEWL