重組人生長(zhǎng)激素在大腸桿菌中分泌表達(dá)及其純化的研究.pdf

1、在大腸桿菌中分泌型表達(dá)重組人生長(zhǎng)激素既有利于消除其在臨床應(yīng)用上的抗原性又有利于提取純化，因此在重組人生長(zhǎng)激素的大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)中越來(lái)越受到青睞。本研究應(yīng)用T7啟動(dòng)子與ompA3引導(dǎo)序列構(gòu)建了高效分泌型表達(dá)重組人生長(zhǎng)激素工程菌pET-ompA3-hGH/BL21(DE3)，在搖瓶水平上，采用多因素正交優(yōu)選法初步篩選培養(yǎng)基成分，進(jìn)而考察葡萄糖對(duì)重組人生長(zhǎng)激素表達(dá)量的影響。在此培養(yǎng)基基礎(chǔ)上優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)條件，分別考察了誘導(dǎo)起始菌密度、誘導(dǎo)溫度、誘

2、導(dǎo)劑濃度和誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間對(duì)重組人生長(zhǎng)激素表達(dá)量的影響。在搖瓶水平優(yōu)化后進(jìn)一步考察了工程菌在發(fā)酵罐水平目的蛋白的表達(dá)情況。在5L發(fā)酵罐中將工程菌pET-ompA3-hGH/BL21(DE3)進(jìn)行補(bǔ)料式發(fā)酵，誘導(dǎo)表達(dá)分泌型重組人生長(zhǎng)激素。通過(guò)對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基成分、補(bǔ)料成分、補(bǔ)料體積、補(bǔ)料時(shí)機(jī)和滴加流速的選擇，分泌表達(dá)重組人生長(zhǎng)激素的量可達(dá)到250mg/L，占周質(zhì)蛋白的44％～54％，發(fā)酵周期縮短為8小時(shí)。用rhGH純蛋白免疫動(dòng)物制備的多克隆抗體制