辣椒輕斑駁病毒快速檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、本研究提純了辣椒輕斑駁病毒，并對(duì)其病毒粒子形態(tài)進(jìn)行了電鏡觀察，采用SDS.聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定了其分子量，制備了用于斑點(diǎn)免疫結(jié)合法(DIBA)和膠體金免疫試紙條(CGIS)法檢測(cè)的高效價(jià)的特異性抗血清，進(jìn)而為快速、準(zhǔn)確檢測(cè)病毒打下了良好的基礎(chǔ)。 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(DAS-ELISA)、斑點(diǎn)免疫結(jié)合法、膠體金免疫試紙條法、RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR等方法和技術(shù)，對(duì)PMMoV檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了研究，并比較了各種檢測(cè)

2、方法的靈敏度及特異性。取得以下結(jié)果： (1)在檢測(cè)1粒陽性種子時(shí)，DAS-ELISA、CGIS 檢測(cè)稀釋限點(diǎn)為1：51200，DIBA稀釋限點(diǎn)為1:12800，RT-PCR檢測(cè)稀釋限點(diǎn)為1:100000，實(shí)時(shí)熒光RT-PCR在稀釋1:1000000時(shí)仍可檢測(cè)到；在檢測(cè)葉片時(shí)，DAS-ELISA、CGIS、DIBA檢測(cè)稀釋限點(diǎn)均為1：3200。 (2)應(yīng)用DIBA 對(duì)國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上購(gòu)買的17份辣椒種子攜帶PMMoV的檢測(cè)結(jié)果表

3、明，不同品種的辣椒種子攜帶PMMoV的帶毒率不同，17份品種只有5份品種種子帶毒率為0％，有7份品種種子帶毒率超過50％，其中有3份品種種子帶毒率超過90％。 (3)RT-PCR檢測(cè)PMMoV在辣椒種子上的帶毒部位結(jié)果表明，PMMoV主要分布在種皮、種子表面，胚乳次之，不侵染胚。 (4)通過對(duì)辣椒種子帶毒與傳毒的關(guān)系研究，帶毒與不帶毒的種子直播后均未發(fā)現(xiàn)發(fā)病植株及檢測(cè)到PMMoV，移栽后，來自陽性種子的1280株植株中只