可溶性凝集素樣受體2在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中的診斷作用及變化機制的研究.pdf

1、心血管病是世界范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡的主要原因。明確心血管疾病及相關(guān)過程的作用機制對于心血管病的及時診斷和治療具有重要意義，因此在過去的幾十年中進行了許多相關(guān)的基礎(chǔ)和臨床的研究。血小板在許多心血管疾?。ㄓ绕涫羌毙怨诿}綜合征）的病理生理機制中扮演著重要的作用，這是由于它們被認(rèn)為參與到動脈粥樣斑塊破裂后的血栓形成中。凝集素樣受體2(CLEC-2)是位于人12號染色體C型凝集素受體家族成員，高表達于巨核細胞和血小板中，被認(rèn)為參與包括血小板活化，淋巴管

2、血管的分化發(fā)育等多種生物學(xué)過程中。我們之前的研究證實小鼠CLEC-2存在著不同長度的剪切體。此外，全長的CLEC-2能夠水解形成可溶性的形式。因此，可溶性形式的受體能夠與配體相互作用，抑制配體與細胞表面受體的結(jié)合，從而調(diào)控病理生理的過程。然而，目前有關(guān)CLEC-2在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中的作用并不明確，這就成為了進行本項研究的初衷。
　　第一部分 血漿sCLEC-2對冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的診斷作用
　　目的:明確血漿

3、sCLEC-2在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中的水平變化及其在冠心病中的臨床意義。
　　方法:連續(xù)選取2011年5月至2016年10月間在蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中國醫(yī)科大附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科住院的冠心病患者146例，其中非急性冠脈綜合征患者(Non-ACS)14例，急性冠脈綜合征(ACS)132例。正常對照組31例。抽取患者及對照個體的靜脈血，采用競爭抑制酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血漿sCLEC-2濃度及sGPVI濃度。比較血漿s

4、CLEC-2在冠心病患者及健康對照個體中的水平差異，并通過亞組分析，明確sCLEC-2在Non-ACS、ACS及對照組中的水平差異;同時比較不同冠脈病變支數(shù)患者間血漿sCLEC-2的差異。GRACE評分對ACS患者進行危險分級后比較不同風(fēng)險組患者間血漿sCLEC-2的差異。進一步通過二元Logistic回歸方法，分析血漿sCLEC-2升高是否為ACS的獨立危險因素。采用受試者操作曲線(ROC)曲線分析，評價血漿sCLEC-2對冠心病的診

5、斷價值。通過Pearson線性相關(guān)方法，評價血漿sCLEC-2和經(jīng)典血小板活化指標(biāo)-血漿sGPVI的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果:冠心病組患者的血漿sCLEC-2水平顯著高于對照組（181.86±146.21pg/mLvs.121.68±56.24pg/mL，P＜0.001）。亞組分析顯示，對照組、Non-ACS組、ACS患者的血漿sCLEC-2濃度分別為121.68±56.24pg/mL、126.47±60.98pg/mL、187.74±1

6、51.42pg/mL，ACS組血漿sCLEC-2水平較Non-ACS組患者(P＜0.05)和對照組明顯升高(P＜0.001)，而Non-ACS組患者血漿sCLEC-2水平較對照組無明顯升高(P＞0.05)。在冠心病患者中冠狀動脈單支病變、雙支病變、三支病變患者三組的血漿sCLEC-2濃度分別是196.98±161.44pg/mL、151.73±118.79pg/mL、190.29±145.87 pg/mL，三組間血漿sCLEC-2水平無

7、統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。根據(jù)GRACE評分，將患者分為低危組、中危組、高危組，三組患者血漿sCLEC-2濃度依次為205.46±185.98pg/mL、177.83±137.53pg/mL、190.37±149.48pg/mL，三組間血漿sCLEC-2水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。二元logistic回歸分析顯示，高血漿sCLEC-2(OR=1.006，95％CI:1.000～1.012，P=0.035)。受試者操作曲線(ROC

8、)分析顯示，高血漿sCLEC-2水平對冠心病具有一定的診斷效能，ROC曲線下面積(AUC)為0.627，95％CI:0.525～0.728，界點193.65pg/mL，敏感度為25.3％，特異度為96.8％(P＜0.05)。Pearson線性相關(guān)分析顯示，血漿sCLEC-2水平與血小板活化指標(biāo)-血漿sGPVI濃度呈顯著正相關(guān)(r=0.474，P＜0.001)。
　　結(jié)論:冠心病患者血漿sCLEC-2水平顯著升高，其中ACS患者sC

9、LEC-2水平顯著高于Non-ACS患者和健康人群。高血漿sCLEC-2水平是ACS發(fā)病的獨立危險因素。高血漿sCLEC-2濃度可作為冠心病的有效診斷指標(biāo)。血漿sCLEC-2與經(jīng)典血小板表面活化指標(biāo)GPVI具有良好相關(guān)性，可能可以作為血小板活化的新監(jiān)測指標(biāo)。
　　第二部分 血漿可溶性CLEC-2水平變化機制研究
　　目的:明確血漿可溶性CLEC-2水平變化的可能的原因及相關(guān)的信號通路機制。
　　方法:流式細胞術(shù)檢測血小

10、板及多種免疫細胞CLEC-2的表達情況。分離健康人洗滌血小板，體外給予50μg/mL氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激后，流式細胞術(shù)檢測平均熒光強度明確CLEC-2從血小板表面脫落;同時利用激酶抑制齊PP2、PRT-060318及Ro-31-8820聯(lián)合ox-LDL刺激血小板明確影響CLEC-2從血小板表面脫落的信號通路。采用凝血酶聯(lián)合ox-LDL及8-pCPT-cGMP刺激洗滌血小板，ELISA分析上清中CLEC-2表達水平的變化;

11、在阻斷分泌放大信號及血小板整合素外向內(nèi)信號的條件下，采用MnTMPyP或PP2或Ro-31-8220處理，明確參與oxLDL調(diào)控血小板分泌CLEC-2的信號通路。
　　結(jié)果:CLEC-2僅在血小板表面出現(xiàn)高表達，而在包括樹突狀細胞、B細胞、T細胞、單核細胞及中性粒細胞等免疫細胞表面低表達。ox-LDL刺激后血小板表面CLEC-2的脫落，這種效應(yīng)是通過Src家族激酶-Syk-PKC信號通路來得以實現(xiàn)的。PKG-cGMP信號參與到血小