鹽藻NAD-3-磷酸甘油脫氫酶同工酶基因功能域的克隆及功能鑒定.pdf

1、Yj2i2242四川大學(xué)碩士學(xué)位論文題目墊鎣盟叁望二≥生墮鹽漁匿氫墮園三睦基旦盈絲域盟盤隆作者鹽壹韭完成日期2QQ!生!旦至魚旦指導(dǎo)教師萱墼墼蕉專業(yè)絲生塹鱟授予學(xué)位日期生旦旦四川大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽生杜氏藻NAD3一磷酸甘油脫氫酶同工酶基因功能域的克隆及功能鑒定微生物學(xué)專業(yè)研究生孫曉菲指導(dǎo)教師曹毅中文摘要植物在受到高鹽(高滲)、干旱和寒冷等脅迫時，體內(nèi)會產(chǎn)生并積累大量的調(diào)滲物以改變細(xì)胞的滲透壓，防止細(xì)胞過度失水。鹽生杜氏藻(Dunalie

2、llasalina，簡稱鹽藻Ds)是目前發(fā)現(xiàn)的世界上最耐鹽的真核光合生物，可以在01～55mol／LNaCI的環(huán)境中生存。鹽藻作為一種典型的嗜鹽生物，調(diào)滲物的合成是其主要的耐鹽策略。其適應(yīng)外界高鹽環(huán)境主要是通過甘油的合成與轉(zhuǎn)化來調(diào)節(jié)滲透壓，恢復(fù)其原來的形狀和大小。鹽藻細(xì)胞內(nèi)甘油含量與外部NaCl濃度呈線性關(guān)系。其甘油代謝的基本過程與酵母細(xì)胞中的十分類似，在此代謝途徑中，NAD一3一磷酸甘油脫氫酶(glycerol3phosphatede

3、hydrogenase，簡稱GPD)是甘油合成途徑中的關(guān)鍵酶，它在NADH的參與下可催化磷酸二羥基丙酮向3磷酸甘油的轉(zhuǎn)化。3一磷酸甘油脫氫酶(GPD)具有多種同工酶形式，廣泛的存在于生物體中發(fā)揮不同的作用。釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)細(xì)胞中存在三種GPD同工酶；擬南芥(Arabidopsisthaliana)中也有三種GPD同工酶；杜氏藻(Dunaliellatertiolecta)GPD同工酶的研究側(cè)重于

4、其天然蛋白的分離和純化，現(xiàn)己發(fā)現(xiàn)三種以NAD為輔基的GPD同工酶；果蠅(Drosophilamelanogaster)中存在相同結(jié)構(gòu)基因編碼的三種不同NADGPD同工酶。鹽生杜氏藻(Dunaliellasalina)中也存在多種GPD同工酶。在實驗室前期工作中，我們首次在基因水平上對鹽藻GPD同工酶進(jìn)行研究。得到了3條GPD同工酶基因的EST序列，經(jīng)過比對將其分別命名為M4D例)D，、NADGPD2和FADGPD。實驗室的前期工作主要側(cè)