真菌疏水蛋白HGFI、HFBI性質(zhì)與應(yīng)用的研究.pdf

1、本文對(duì)真菌疏水蛋白HGFI、HFBI性質(zhì)與應(yīng)用進(jìn)行了研究。文章首先選用狄樹(shù)花的平皿菌絲建立了灰樹(shù)花的cDNA文庫(kù)，根據(jù)真菌疏水蛋白的分子量范圍，從cDNA文庫(kù)中隨機(jī)篩選了50個(gè)插入片段大小在500—1000bp的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)相似的轉(zhuǎn)化子編碼同一段基因序列，其編碼的蛋白符合真菌疏水蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)通式。采用真菌疏水蛋白的分離方法，分離到狄樹(shù)花真菌疏水蛋白，經(jīng)過(guò)RP-HPLC純化，得到的蛋白在電泳中顯示為8kDa條帶。

2、經(jīng)過(guò)N端氨基酸序列測(cè)定，證明分離到的灰樹(shù)花疏水蛋白與hgfl編碼的蛋白HGFI的N端氨基酸序列是一致的。在瑞氏木霉疏水蛋白HFBI小試培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，將發(fā)酵規(guī)模擴(kuò)大為500L，每升發(fā)酵液中疏水蛋白HFBI的產(chǎn)量可以達(dá)到1.130g。在疏水蛋白分離純化方面，建立了HFBI的分離純化的新工藝，通過(guò)SDS、KCl以及Bero1532的雙水相抽提，可以特異性的分離HFBI，再通過(guò)凝膠過(guò)濾層析和離子交換層析，可以得到較高純度的HFBI，總回收率為6