腸淋巴液引流對(duì)失血性休克小鼠腎組織ACE-ACE2平衡的作用.pdf

1、重度失血性休克引起的急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)如不能及時(shí)糾正，則進(jìn)一步引起多器官功能障礙綜合征(multiple organdysfunction syndrome，MODS)甚至多器官衰竭(multiple organ failure，MOF)，是重癥休克患者死亡的重要原因之一?，F(xiàn)在有大量的研究證據(jù)表明:通過腸淋巴管(mesenteric lymph duct，MLD)結(jié)扎或?qū)⑿菘四c淋巴液引流至體外的

2、措施，均可以達(dá)到減輕失血性休克后的AKI，由此可見經(jīng)過腸淋巴途徑的腸源性感染在重癥休克后的AKI中發(fā)揮著重要作用。腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(renin-angiontensin-aldosterone system，RAAS)是人體內(nèi)及其關(guān)鍵的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)，調(diào)節(jié)水和鹽的代謝，調(diào)節(jié)心臟以及腎臟功能，維持血容量和血管張力，它廣泛存在于與循環(huán)系統(tǒng)相關(guān)的血管、心臟以及中樞系統(tǒng)、腎臟、腎上腺等組織器官中。目前的研究表明，RAAS有兩條關(guān)鍵軸:

3、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）-血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)-血管緊張素Ⅱ-1型受體(angiotensinⅡ1receptor，AT1R)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(angiotensin converting enzyme2，ACE2)-血管緊張素(1-7)[angiotensin(1-7)，Ang(1-7)]-Mas受體(Mas receptor，MasR)。

4、其中，ACE2裂解AngⅡ生成Ang(1-7)，激活MasR發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用。因此，ACE2-Ang(1-7)-MasR軸被認(rèn)為是ACE-AngⅡ-AT1R的反向調(diào)節(jié)軸，二者共同調(diào)節(jié)RAAS平衡。那么在失血性休克引起AKI的過程中，腎組織ACE和ACE2的平衡狀態(tài)如何？腸淋巴液引流對(duì)腎組織ACE和ACE2的平衡有何作用？值得研究。
　　為了探討休克腸淋巴液引流對(duì)失血性休克小鼠腎組織ACE/ACE2平衡的作用。本實(shí)驗(yàn)選用24只雄性B

5、ALB/c小鼠，隨機(jī)分為四組:對(duì)照組、假手術(shù)組、休克組、休克腸淋巴液引流組。小鼠經(jīng)麻醉后，用注射器經(jīng)右股動(dòng)脈注射肝素鈉后，插管將其連接到用于監(jiān)測平均動(dòng)脈血壓（mean anery pressure，MAP）的生物信號(hào)采集系統(tǒng);左股動(dòng)脈連接注射器將其固定于抽注機(jī)上以備放血;剝離與腸系膜上動(dòng)脈相伴行的MLD;手術(shù)結(jié)束穩(wěn)定30 min后，左股動(dòng)脈放血，10 min內(nèi)將MAP降至40 mmHg，實(shí)驗(yàn)過程中維持MAP在（40±2）mmHg水平;維

6、持低血壓1h后，將林格氏液與放出的全血1∶1混勻經(jīng)左股動(dòng)脈輸液復(fù)蘇，于30 min完成;輸液結(jié)束后繼續(xù)觀察6h。休克組以及休克腸淋巴液引流組按上述方法復(fù)制失血性休克模型，休克腸淋巴液引流組在輸液完成后立即行MLD插管，引流腸淋巴液。假手術(shù)組僅進(jìn)行相同的操作，不放血、不輸液，觀察至相對(duì)應(yīng)的時(shí)間。對(duì)照組麻醉后直接取材。留取左腎，-80℃保存，制備組織勻漿，ELISA方法檢測腎臟組織中AngⅡ和Ang(1-7)含量;留取右腎，-80℃保存，Q

7、RT-PCR法檢測ACE mRNA、ACE2 mRNA、AT1R mRNA、Mas1R mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組小鼠腎組織ACE mRNA、AngⅡ、AT1RmRNA均高于對(duì)照組;休克組小鼠腎組織ACE mRNA、AngⅡ、AT1RmRNA均顯著高于對(duì)照組、假手術(shù)組;腸淋巴液引流組小鼠腎組織ACE mRNA、AngⅡ、AT1R mRNA顯著低于休克組，但仍高于對(duì)照組、假手術(shù)組。假手術(shù)組小鼠腎組織ACE2 mRNA、A

8、ng(1-7)、Mas1RmRNA均低于對(duì)照組，但ACE2 mRNA更為顯著;休克組小鼠腎組織ACE2 mRNA、Ang(1-7)、Mas1R mRNA均顯著低于對(duì)照組，其中ACE2mRNA和Mas1R mRNA顯著低于假手術(shù)組;腸淋巴液引流顯著升高了休克組小鼠腎組織ACE2 mRNA、Ang(1-7)、Mas1R mRNA，但仍低于對(duì)照組、假手術(shù)組。假手術(shù)組小鼠腎組織中ACE/ACE2高于對(duì)照組;休克組小鼠腎組織中ACE/ACE2顯著

9、高于對(duì)照組、假手術(shù)組;腸淋巴液引流組小鼠腎組織ACE/ACE2比值顯著低于休克組，但仍顯著高于對(duì)照組、假手術(shù)組。
　　研究結(jié)果表明:失血性休克后腎組織ACE-AngⅡ-AT1R軸表達(dá)上調(diào)、ACE2-Ang(1-7)-MasR軸表達(dá)下調(diào);腸淋巴液引流調(diào)節(jié)了失血性休克小鼠腎組織ACE/ACE2的平衡。研究結(jié)果補(bǔ)充并完善了“AKI的腸淋巴途徑學(xué)說”，為以淋巴液為靶點(diǎn)，調(diào)節(jié)ACE/ACE2平衡，為失血性休克后AKI的臨床防治提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)