HLA-B、HLA-Cw基因多態(tài)性及分子進(jìn)化的研究.pdf

1、人類主要組織相容性抗原系統(tǒng)(MHC，maior histocompatibility complex)即白細(xì)胞抗原系統(tǒng)(HLA，human leukocyte antigen)是人類基因組中多態(tài)性最高的區(qū)域，其編碼的糖蛋白分子在人類免疫反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。通過(guò)對(duì)MHC基因分子結(jié)構(gòu)以及分子進(jìn)化的研究可以獲得許多該基因功能上的信息，對(duì)進(jìn)一步了解其生物學(xué)功能有主要的指導(dǎo)作用。 首先，本文采用"長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增、克隆、測(cè)序后拼接

2、"的策略，獲得了17條中國(guó)漢族個(gè)體HLA-Cw全長(zhǎng)4.5kb和15條B全長(zhǎng)4.2k的單倍型序列，建立了全基因的高密度遺傳多態(tài)性圖譜。對(duì)該區(qū)域的群體遺傳學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，整個(gè)基因區(qū)域的高多態(tài)性具有跨物種分布的特點(diǎn)，表明受到了平衡選擇作用。系統(tǒng)發(fā)育分析以及連鎖不平衡分析都表明HLA-B在進(jìn)化過(guò)程中發(fā)生了頻繁的位點(diǎn)內(nèi)重組。在Cereb等人提出的RGD理論(recombination and subsequent genetic drift)的基礎(chǔ)上

3、更換理論定義對(duì)象，以及結(jié)合Holliday重組模型，我們很好地解釋了小片段重組如何解決了平衡選擇和負(fù)選擇在HLA-B的進(jìn)化過(guò)程中帶來(lái)的沖突。三個(gè)位點(diǎn)的dotplot對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)在第二和第三內(nèi)含子為重組熱點(diǎn)，進(jìn)一步支持了我們的觀點(diǎn)。 對(duì)HLA三個(gè)經(jīng)典位點(diǎn)的多態(tài)性分析比較發(fā)現(xiàn)，HLA-Cw作為一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的個(gè)體在啟動(dòng)子的調(diào)控元件和intron 4上與HLA-A、HLA-B截然不同。首先HLA-Cw的啟動(dòng)子整體多態(tài)程度與HLA-A、

4、HLA-B差異不大，但SNP位點(diǎn)集中在調(diào)控元件上，并且存在完全不同的分布模式。其次，intron 4作為HLA-A、HLA-B中最保守的區(qū)域之一，卻在HLA—Cw中顯示高度的多態(tài)性。參考其他研究對(duì)Cw*07與其他Cw等位基因型的表達(dá)差異以及Jane等人對(duì)Cw轉(zhuǎn)錄后mRNA穩(wěn)定性的研究結(jié)果，對(duì)三個(gè)位點(diǎn)在該區(qū)域的序列比較分析，我們認(rèn)為intron 4通過(guò)影響mRNA的穩(wěn)定性，協(xié)同調(diào)控元件在HLA一類基因的表達(dá)中起到重要的作用。同時(shí)我們選取了