靶標蛋白分離和鑒定新技術的探索性研究.pdf

1、蛋白質組學是當前生命科學領域研究的重要熱點之一，它從整個蛋白質組水平上揭示生命過程和規(guī)律。蛋白質組的鑒定涉及了若干關鍵的技術平臺，主要包括蛋白質的分離富集、蛋白質的分析和生物信息學研究，蛋白質組的鑒定為蛋白質結構、翻譯后修飾、以及蛋白質相互作用等方面的研究提供了重要基礎。本課題則針對蛋白質的分離富集、蛋白質修飾的分析以及蛋白質相互作用等關鍵技術環(huán)節(jié)，進行了新的探索性研究。本研究分為三個部分：
　　 第一部分以組蛋白作為目標蛋白，

2、建立了一種基于適配體技術分離富集組蛋白的新方法。該方法較以往的技術更為簡便，具有較好的組蛋白識別功能，且能夠直接從復雜的細胞裂解液中提取組蛋白的成分。此外，該方法能夠與質譜技術很好的結合用于組蛋白翻譯后修飾的鑒定研究。
　　 第二部分以酵母蛋白激酶為目標蛋白，運用基于質譜的蛋白質組學方法系統地分析了激酶蛋白半胱氨酸殘基上的各種修飾形式。第一，我們探索性地揭示了5種主要的體外修飾形式產生的機理和原因；第二，發(fā)現了3種潛在的翻譯后修

3、飾；第三，利用質譜解析和生物信息學分析在半胱氨酸殘基上發(fā)現了28種未知修飾形式。我們的初步研究不僅擴展了目前已知的半胱氨酸殘基的修飾形式，而且為揭示蛋白激酶新的信號轉導功能和新的修飾形式的提供了線索。
　　 第三部分以食管癌細胞中與腫瘤侵襲密切相關的細胞骨架結合蛋白Ezrin為目標，運用體內同位素標記定量方法(SILAC)結合生物信息學分析，鑒定了兩種不同侵襲水平的食管癌細胞中，可能與Ezrin存在相互作用的所有蛋白及其差異性表