PRDM16、CIDE-B蛋白在脂肪組織中的表達(dá)及與肥胖的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　為探討PRDM16、CIDE-B在成人脂肪組織中的表達(dá)水平及與肥胖的關(guān)系，本研究通過(guò)檢測(cè)PRDM16、CIDE-B蛋白分別在正常體重者和超重肥胖者的皮下脂肪和腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織中的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)PRDM16、CIDE-B蛋白相對(duì)表達(dá)水平與超重肥胖的關(guān)系；同時(shí)檢驗(yàn)PRDM16、CIDE-B基因啟動(dòng)子甲基化水平與二者蛋白相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系，探討PRDM16、CIDE-B基因甲基化與蛋白表達(dá)的關(guān)系。
　　方法：
　

2、　選取醫(yī)院的腹部手術(shù)患者126例，男性25例，女性101例，排除孕婦、殘障或精神障礙者、繼發(fā)性肥胖者、惡性腫瘤患者及乙肝、艾滋病、結(jié)核等傳染性疾病患者。收集各研究對(duì)象的身高、體重、年齡、血糖值等生理生化指標(biāo)。采用我國(guó)肥胖診斷標(biāo)準(zhǔn)，將研究對(duì)象分為正常體重組（18.5kg/m2　　首先分別提取皮下脂肪和大網(wǎng)膜脂肪組織的總蛋白，然后采用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)，其中PRDM1

3、6目的蛋白電泳采用8％分離膠，5%濃縮膠，CIDE-B蛋白電泳采用12%分離膠，5%分離膠，電泳過(guò)后轉(zhuǎn)膜2小時(shí)，恒壓設(shè)為80V，最后進(jìn)行一抗二抗免疫反應(yīng)，將配置混合好的ECL超敏發(fā)光液在凝膠成像系統(tǒng)中與免疫反應(yīng)后的PVDF膜接觸進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，將所得條帶圖進(jìn)行拍照保存。采用Gel pro Analyzer軟件分析目的條帶的灰度值，每一個(gè)樣本的目的蛋白相對(duì)表達(dá)量以目的條帶的灰度值和相應(yīng)樣本GAPDH的條帶灰度值的比值表示。
　　采用I

4、BM SPSS Statistics21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組差異比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)，三組差異比較采用方方差分析或Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；各生理生化因素對(duì)蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響程度分析采用多重線性回歸；皮下和大網(wǎng)膜脂肪組織目的蛋白的表達(dá)量差異采用配對(duì)t檢驗(yàn)或Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)；檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.配對(duì)樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯

5、示，PRDM16蛋白在皮下脂肪組織中的相對(duì)表達(dá)量高于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.001，P=0.319）；CIDE-B 蛋白在皮下脂肪組織中的相對(duì)表達(dá)量高于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.340，P=0.021）。
　　2.皮下脂肪組織的PRDM16蛋白的相對(duì)表達(dá)量在正常組和超重肥胖組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.587，P=0.011），且正常組的相對(duì)表達(dá)量高于超重肥胖組。大網(wǎng)膜脂肪組織

6、的PRDM16基因的相對(duì)表達(dá)量在正常體重組和超重肥胖組之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.671，P=0.097）。
　　3.皮下脂肪組織的CIDE-B基因的相對(duì)表達(dá)量在正常體重組和超重肥胖組的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.558，P=0.122）。大網(wǎng)膜脂肪組織的CIDE-B基因的相對(duì)表達(dá)量在正常體重組和超重肥胖組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.253，P=0.026），且超重肥胖組的CIDE-B的相對(duì)表達(dá)量高于正常體重組。
　

7、　4.皮下脂肪組織中，收縮壓<140mmHg的CIDE-B基因的蛋白相對(duì)表達(dá)量小于收縮壓≥140mmHg的CIDE-B的蛋白相對(duì)表達(dá)量，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.319,P=0.025)；大網(wǎng)膜脂肪組織中，舒張壓<90mmHg的CIDE-B基因的蛋白相對(duì)表達(dá)量小于舒張壓≥90mmHg的CIDE-B的蛋白相對(duì)表達(dá)量，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.290,P=0.024)。三組總膽固醇水平的CIDE-B蛋白相對(duì)表達(dá)量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=

8、7.160,P=0.028），進(jìn)一步多重比較結(jié)果顯示，3.0　　5.各生理生化指標(biāo)與蛋白相對(duì)表達(dá)量的多重線性回歸分析結(jié)果顯示，BMI與皮下PRDM16蛋白相對(duì)表達(dá)量有關(guān)（β=-0.282, P=0.004），BMI水平低者的PRDM16蛋白表達(dá)量高于BMI水平高者。BMI與皮下CIDE-B蛋白相對(duì)表達(dá)量有

9、關(guān)（β=0.213,P=0.025），BMI水平高者的CIDE-B蛋白表達(dá)量高于BMI水平低者。
　　6.皮下脂肪組織PRDM16蛋白相對(duì)表達(dá)量與大網(wǎng)膜PRDM16蛋白相對(duì)表達(dá)量呈顯著的正相關(guān)（r=0.482，P<0.001），皮下脂肪組織CIDE-B蛋白相對(duì)表達(dá)量與大網(wǎng)膜CIDE-B相對(duì)表達(dá)量呈顯著正相關(guān)（r=0.363，P<0.001）。而PRDM16與CIDE-B的蛋白相對(duì)表達(dá)量不存在線性相關(guān)（P>0.05）。
　　7

10、.皮下脂肪組織中，PRDM16基因的 CPG_28位點(diǎn)的甲基化水平與蛋白相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（β=-3.762，P=0.032），腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織中，PRDM16基因的CPG_28(β=-4.726，P=0.002)位點(diǎn)的甲基化水平與蛋白相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甲基化水平高的蛋白表達(dá)水平較低。
　　結(jié)論：
　　PRDM16、CIDE-B蛋白表達(dá)與成人肥胖存在一定的相關(guān)性，皮下脂肪組織中，正常體重者的PRD