藏系綿羊三種促毛生長(zhǎng)因子基因的克隆及營(yíng)養(yǎng)差異對(duì)其mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、藏系綿羊又稱為藏羊，是我國(guó)三大原始綿羊品種之一，主要分布在高寒牧區(qū)，青海是主要產(chǎn)區(qū)。藏系綿羊被毛纖維粗長(zhǎng)，毛質(zhì)細(xì)膩且保暖性好，是制造床毯、地毯等的良好原料。羊毛的生長(zhǎng)本身就是各種生長(zhǎng)因子或激素相互作用，共同促進(jìn)毛囊生長(zhǎng)的結(jié)果，本研究以IGF-Ⅰ、VEGF和HGF三種基因?yàn)檠芯繉?duì)象，從自然放牧的藏系綿羊所產(chǎn)1月齡羔羊皮膚樣本中提取了總Mrna，依據(jù)GenBank中普通綿羊的基因序列，設(shè)計(jì)特異性引物，分別擴(kuò)增了表達(dá)IGF-Ⅰ、VEGF和HG

2、F三種生長(zhǎng)因子的功能基因，并對(duì)所擴(kuò)增出的基因進(jìn)行了克隆和序列分析；另外，還采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)SYBR Green I熒光染料法，對(duì)妊娠后期藏系綿羊進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)飼后，就其所產(chǎn)羔羊體內(nèi)的IGF-I、VEGF和HGF基因Mrna的表達(dá)水平進(jìn)行了相對(duì)定量分析。
　　 本研究取得了如下結(jié)果：
　　 1.成功克隆出了藏系綿羊VEGF基因全長(zhǎng)CDS共573bp、IGF－ⅠCdna序列共940bp和HGF基因Cdna的部分序列，長(zhǎng)

3、度為108bp。經(jīng)序列比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，所研究的這三個(gè)基因與普通綿羊、山羊、牛、馬、豬、人、雞、鴨、大鼠和小鼠等物種之間具有高度同源性，其相似性在100％至74.2％之間，其中藏系綿羊與普通綿羊的這三個(gè)基因的同源性最高，相似性為100％。
　　 2.建立了快速檢測(cè)IGF-I、VEGF和HGF基因表達(dá)量的方法，通過(guò)該方法的檢測(cè)結(jié)果表明：給妊娠后期藏系母羊補(bǔ)飼營(yíng)養(yǎng)舔磚后，所產(chǎn)羔羊體內(nèi)IGF-Ⅰ、VEGF和HGF基因的表達(dá)水平均比對(duì)照組高，