豚鼠精子獲能和超激活運動機(jī)理的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本試驗的目的是研究Caz+和HC03-調(diào)節(jié)豚鼠精子體外獲能、超激活運動和蛋白酪氨酸磷酸化的信號機(jī)制。 1 cAMP促效物對豚鼠精子獲能、超激活運動和蛋白酪氨酸磷酸化的作用 將豚鼠精子分別于TALP、缺Ca2+的TALP、缺HCO3-的TALP及分別加有cAMP促效物(1mM dbcAMP和100μM IBMX)的培養(yǎng)液中孵育.取出不同孵育時間段的精子，分析超激活運動精子和獲能精子的百分率以及蛋白酪氨酸磷酸化水平的變化情況

2、，用金霉素( CTC)染色法檢測精子獲能情況，結(jié)果顯示，缺Ca2+或HCO，-的TALP培養(yǎng)液顯著抑制了超激活運動和獲能精子的百分率(p<0.01)；在缺HC03-的培養(yǎng)液中加入1mMdbcAMP和100μM IBMX顯著提高了超激活運動精子和獲能精子的百分率，并恢復(fù)到了正常培養(yǎng)下的水平；在缺Ca2+的培養(yǎng)液中加入1mM dbcAMP和100mμIBMX雖然也提高了超激活運動和獲能精子的百分率但是與正常水平比較還有顯著差異(P<0.01

3、)。Western blotting檢測蛋白酪氨酸磷酸化水平的變化，結(jié)果顯示，缺Ca2+或HC03-的TALP培養(yǎng)液抑制了蛋白酪氨酸磷酸化水平的增加；加入dbcAMP和IBMX提高了這兩種情況下的蛋白酪氨酸磷酸化水平，孵育7h時蛋白酪氨酸磷酸化水平提高到了正常培養(yǎng)水平。 2 PKA抑制劑對豚鼠精子獲能、超激活運動和蛋白酪氨酸磷酸化的影響 將豚鼠精子分別于TALP及含有不同濃度的PKA特異性抑制劑H-89(0.1、1、3、

4、5、10μM)的TALP培養(yǎng)液中孵育7h。分析精子獲能、超激活運動及蛋白酪氨酸磷酸化水平。用金霉素( CTC)染色法檢測精子獲能情況，Western blotting檢測蛋白酪氨酸磷酸化水平的變化情況。結(jié)果顯示，與對照組比較(TALP培養(yǎng)液)，H-89顯著抑制了精子超激活運動和獲能，并且這種抑制作用呈濃度依賴性；0.1μM的H-89降低了80、45、40kDa三種蛋白的酪氨酸磷酸化水平，在1μM的H-89作用下僅檢測到40kDa的酪氨酸

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