帕瑞昔布鈉對大鼠離體精子運(yùn)動(dòng)、體外獲能、頂體反應(yīng)及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　隨著新型非甾體類抗炎藥在臨床的廣泛應(yīng)用，其生殖毒性越來越引起人們的廣泛關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)旨在探討非甾體類抗炎藥帕瑞昔布鈉對大鼠離體精子運(yùn)動(dòng)、獲能和頂體反應(yīng)的影響，并對其機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法：
　　1.成年雄性SD大鼠24只，用頸椎脫臼法處死，取其附睪精子，分離純化后制成精子懸液。
　　2.用Western Blot方法檢測COX-2蛋白在精子上的表達(dá)。
　　3.分組情況如下:對照組(C)，帕瑞昔布

2、鈉100uM組(P100)，500uM組(P500)，1000uM組(P1000)，每組重復(fù)6次。
　　4.在37℃孵箱中分別暴露于不同濃度的帕瑞昔布鈉5h。
　　5.采用計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)(CASA)對精子的運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括精子運(yùn)動(dòng)活力[（a+b）％]，平均速度(VAP)、直線速度(VSL)、曲線速度(VCL)和側(cè)擺幅度(ALH)。
　　6.采用金霉素(CTC)熒光染色法評(píng)價(jià)精子獲能，其中“F”型為未獲能精

3、子，“B”型為獲能精子，“AR”型為頂體反應(yīng)精子。以[(B+AR)％]表示已發(fā)生獲能的精子。
　　7.經(jīng)過5h培養(yǎng)已經(jīng)充分獲能的精子標(biāo)本，加入100uM帕瑞昔布鈉1h，采用考馬斯亮藍(lán)法評(píng)價(jià)帕瑞昔布鈉對精子頂體反應(yīng)的影響。
　　8.用ELISA方法檢測精子和培養(yǎng)基中PGE2，PGF2a的變化。
　　結(jié)果：
　　1.COX-2在大鼠精子上存在表達(dá)。
　　2.與對照組相比，P100、P500、P1000組精子運(yùn)動(dòng)

4、活力[(a+b)％]、平均速度(VAP)、直線速度(VSL)、曲線速度(VCL)和側(cè)擺幅度(ALH)呈劑量依賴性的顯著降低(P＜0.05)。
　　3.P100、P500、P1000組精子獲能程度比對照組明顯降低（P＜0.05），抑制程度隨加入濃度增加而增高。
　　4.P100組頂體反應(yīng)與對照組無顯著性差異。
　　5.P100組精子獲能培養(yǎng)5h后，精子中PGE2，PGF2a濃度降低，培養(yǎng)基中PGE2，PGF2a濃度升高。