鐵皮石斛組培條件的正交試驗與基于SRAP分子標記的遺傳多樣性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鐵皮石斛原球莖多次繼代培養(yǎng)后,分化能力減弱,運用正交實驗方法研究在6-BA,IBA,pH三個因素三水平下的L9(34)實驗。得出鐵皮石斛原球莖在N6的培養(yǎng)基上最佳分化配方為6BA的濃度為2mg/L,IBA濃度為0.2mg/L,pH值為5.8。 嘗試用K+代替部分添加物,運用L9(34)正交實驗,研究不同培養(yǎng)基種類,瓊脂的含量,以及KCl濃度對于鐵皮石斛叢生苗生根的影響。結果證明,鐵皮石斛叢生苗在N6的培養(yǎng)基,KCl為2.5mol

2、/L,瓊脂的含量為4g/L,最有利于根的生長。 相關序列擴增多態(tài)性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)是一種新型的基于PCR的標記系統(tǒng),由美國加州大學蔬菜作物系Li與Quiros博士于2001年提出。具有簡便,穩(wěn)定,中等產率和容易得到選擇條帶序列的特點。 針對鐵皮石斛SRAP反應的特點,參考有關文獻,設計了引物,對鐵皮石斛SRAP反應體系中各個主要影響因子進行了優(yōu)化

3、和篩選,建立了標記位點清晰、穩(wěn)定性強,重復性好的,可用于鐵皮石斛SRAP-PCR分析的最適反應體系。 從設計的81對引物中,篩選多態(tài)性最好的兩對引物對鐵皮石斛的12個野生居群進行SRAP擴增。共獲得91個DNA片段,其中多態(tài)性片段79個,占總帶數的86.81%,并運用POPGENE1.31和AMOVAversion1.55軟件分析了鐵皮石斛12個野生居群的SRAP分子指紋數據。結論為鐵皮石斛種群間的基因分化系數Gsl.為0.33

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