miR-181a調(diào)控谷氨酸-GABA受體在苯丙胺類興奮劑使用障礙中的作用機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，其AMPA受體介導(dǎo)興奮性信號快速傳遞。γ-氨基丁酸（GABA），是腦內(nèi)最重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，其中GABRA1在整個GABA受體中起到最重要的中樞抑制作用。有很多研究表明谷氨酸、GABA受體在阿片類、酒精等成癮物質(zhì)長期濫用導(dǎo)致的腦功能損傷中起到重要的作用，最終導(dǎo)致使用者產(chǎn)生成癮物質(zhì)使用障礙，但苯丙胺類中樞興奮劑使用對谷氨酸、GABA受體表達(dá)的影響及可能的機(jī)制尚未見報道。

2、>　　目的:
　　探討苯丙胺類興奮劑使用對谷氨酸受體基因 GRIA2和 GABA受體基因 GABRA1表達(dá)的影響，并尋找異常表達(dá)的可能調(diào)控機(jī)制，為苯丙胺類興奮劑使用障礙預(yù)后判斷和治療靶點(diǎn)奠定理論基礎(chǔ)。
　　材料和方法:
　　1.通過ELISA法對苯丙胺類興奮劑使用障礙者外周血谷氨酸受體GRIA2基因及GABA受體GABRA1基因編碼蛋白進(jìn)行檢測，明確苯丙胺類興奮劑長期慢性使用導(dǎo)致相關(guān)受體功能障礙。
　　2.構(gòu)建甲

3、基苯丙胺暴露神經(jīng)細(xì)胞模型，使用逆轉(zhuǎn)錄和Western blot等方法，檢測甲基苯丙胺暴露后對神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸受體基因GRIA2和GABA受體基因GABRA1表達(dá)的影響。
　　3.通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)及Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)行miR-181a與GRIA2、GABRA1基因靶向調(diào)控關(guān)系驗(yàn)證。
　　4. Sequenom MassARRY質(zhì)譜基因分析法檢測GABRA1基因12個單核苷酸突變位點(diǎn)，尋找GABRA1基因表達(dá)

4、異常的原因。
　　結(jié)果:
　　1.苯丙胺類興奮劑使用障礙組GRIA2基因編碼蛋白表達(dá)（32.58±10.46）高于健康對照組（23.56±9.68）（p<0.01）。苯丙胺類興奮劑使用障礙組GABRA1基因編碼蛋白表達(dá)低于健康對照組（p<0.05）。
　　2.細(xì)胞模型結(jié)果顯示，甲基苯丙胺升高GRIA2 mRNA和蛋白表達(dá)，甲基苯丙胺同樣升高GABRA1 mRNA和蛋白表達(dá)。
　　3.熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)和West

5、ern blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-181a負(fù)向調(diào)控GRIA2，GABRA1與miR-181a無負(fù)向調(diào)控關(guān)系。
　　4.正常對照組與苯丙胺類興奮劑使用障礙組在GABRA1基因12個SNP位點(diǎn)等位基因與基因型頻率比較結(jié)果顯示，兩組中各位點(diǎn)等位基因與基因型頻率比較未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.苯丙胺類興奮劑使用損害谷氨酸受體GRIA2和GABA受體GABRA1表達(dá)。
　　2.苯丙胺類興奮劑