遼寧地區(qū)漢族人群MICB基因437817、445861-446216 SNP位點(diǎn)遺傳多態(tài)性及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用.pdf

1、MHC-1鏈相關(guān)基因B(MICB)又稱PerB11.2，屬M(fèi)HC-Ⅰ類區(qū)域非經(jīng)典的HLA-Ⅰ類基因，具有編碼、轉(zhuǎn)錄、表達(dá)蛋白的功能。MICB基因在HLA-B基因座著絲粒端約141.2kb，全長(zhǎng)12.9 kb。它在腸上皮細(xì)胞的表面表達(dá)，不需β2微球蛋白的輔助，也不需結(jié)合抗原肽。作為NKG2D的配體，它與NKG2D/DAP10結(jié)合、傳遞細(xì)胞活化信號(hào)，為γδT細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、NK細(xì)胞等發(fā)揮其免疫功能提供分子基礎(chǔ)。 MICB基因是在

2、1994年首次被Bahram等人發(fā)現(xiàn)的。1997年Hitoshi Ando等人對(duì)MICB基因進(jìn)行遺傳變異研究，確定了MICB基因多態(tài)性的存在。2007年，NCBI報(bào)道在MICB基因中發(fā)現(xiàn)264個(gè)SNP位點(diǎn)。 目前，困內(nèi)外對(duì)于MICB基因SNP頻率調(diào)查的報(bào)告較少。本研究應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)，調(diào)查遼寧地區(qū)北方漢族人群MICB基因第3外顯子437817SNP位點(diǎn)及啟動(dòng)子區(qū)445861/446216位點(diǎn)的分布狀況，為法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和

3、親權(quán)鑒定提供必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 材料與方法 1、228例靜脈抗凝血取自遼寧地區(qū)漢族健康無血緣關(guān)系獻(xiàn)血者。40例已知親緣關(guān)系家系由法醫(yī)血清學(xué)教研室提供。 2、應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)調(diào)查遼寧地區(qū)北方漢族人群MICB基因第3外顯子437817位點(diǎn)及啟動(dòng)區(qū)445861/446216位點(diǎn)頻率，并用于親子鑒定案例。 3、直接計(jì)數(shù)法計(jì)算437817、445861、446216位點(diǎn)SNP頻率；進(jìn)行Hardy-Weinbe

4、rg平衡檢驗(yàn)以及連鎖不平衡分析；按Fisher法計(jì)算個(gè)人識(shí)別率(DP)，按Odelberg法計(jì)算非父排除率(EPP)，不同群體之間等位基因頻率分布的差異用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、437817位點(diǎn)在遼寧地區(qū)漢族人群中檢測(cè)出兩個(gè)等位基因C/G，等位基因C的頻率為0.933，等位基因G的頻率為0.067，兩個(gè)等位基因可以構(gòu)成三種基因型：C/C型、C/G型和G/G型。其中C/C型197例，C/G型3

5、1例，頻率分別為86.4％、13.6％，未檢測(cè)出G/G型。 2、445861/446216位點(diǎn)構(gòu)成四種等位基因組合型，在遼寧地區(qū)漢族人群中只檢測(cè)出GC、GG、CC三種等位基因組合型，未檢測(cè)出CG型。其中GC等位基因組合的頻率為55.0％，GG為28.3％，CC為16.7％。在445861/44.6216位點(diǎn)10種理論組合基因型中檢出6種，即GG/GC、GC/GC、CC/GC、CC/GG、GG/GG和CC/CC，頻率分別為32.9

6、％、28.9％、19.3％、8.8％、7.5％和2.6％。 3、用MICB基因445861/446216位點(diǎn)等位基因組合型檢測(cè)40例親子鑒定案例，有36例雙親均可以提供給孩子相應(yīng)的等位基因；4例被控父不能提供給孩子相應(yīng)等位基因，提示可能排除。 討論 MICB基因與MICA及HLA-Ⅰ類基因相似，具有較高的遺傳多態(tài)性。隨著研究深入發(fā)展，所發(fā)現(xiàn)MICB單核苷酸變異的數(shù)目越來越多。到目前為止，已經(jīng)確定的SNP的數(shù)目可達(dá)

7、264個(gè)。MICB基因作為功能性基因，其多態(tài)性與某些免疫性疾病有關(guān)。437817、445861/446216SNP位點(diǎn)的變異與某些免疫性疾病的相關(guān)性也有待進(jìn)一步研究。 為證實(shí)MICB445861/446216位點(diǎn)組合基因型酶切結(jié)果的可靠性，我們對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析，所得結(jié)果與目的序列一致。 目前尚未見到有關(guān)MICB基因437817SNP位點(diǎn)頻率的其他報(bào)道。445861/446216位點(diǎn)的研究報(bào)道只見于西班牙人群，

8、應(yīng)用SPSS13.0軟件對(duì)遼寧漢族和西班牙人群進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明有顯著性差異。 445861/446216位點(diǎn)等位基因組合是具有較高鑒別能力的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)，個(gè)人識(shí)別幾率可達(dá)0.756，非父排除率為0.3437。在法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親子鑒定中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。應(yīng)用MICB基因445861/446216位點(diǎn)等位基因組合型對(duì)40例親子鑒定進(jìn)行檢測(cè)，36例未排除生物學(xué)親子關(guān)系，4例的被控父不能提供生物學(xué)父親應(yīng)該具有的組合型，提示排除

9、父權(quán)。上述研究結(jié)果表明該系統(tǒng)可以應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)親子鑒定。 結(jié)論 1、MICB基因437817、445861、446216三個(gè)SNP位點(diǎn)在遼寧漢族群體中具有遺傳多態(tài)性，且符合Hardy-Weinberg平衡。 2、MICB基因445861/446216位點(diǎn)等位基因組合型分布在中國(guó)遼寧漢族和西班牙人群之間具有群體差異。 3、MICB基因445861/446216位點(diǎn)等位基因組合具有較高的個(gè)人識(shí)別能力和非父排除率