遼寧漢族人群IL-1A基因-889、+4716和+4845SNP位點多態(tài)性及法醫(yī)學意義研究.pdf

1、單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)作為繼限制性酶切片段多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)和短串聯(lián)重復序列(shorttandem repeat，STR)之后的第三代DNA遺傳標記，由于含量豐富、具有較高的遺傳穩(wěn)定性，在法醫(yī)學領域顯示出廣闊的應用前景。 白細胞介素1(Interleukin-1，IL-1)是一種炎癥

2、前期細胞因子。它參與人體的多種生理及病理過程，在炎癥和免疫反應中起重要的調節(jié)作用。IL-1存在α和β兩種配體形式及IL-1r受體形式。IL-1基因簇位于人類第2號染色體長臂1區(qū)4帶上，包括IL-1A，IL-1B，IL-1RN三個基因區(qū)，長約430kb(IL-1A 0 kb～35 kb，IL-1B 70 kb～110 kb，IL-1RN 330 kb～430 kbl。IL-1A基因和IL-1B基因均由7個外顯子和6個內含子組成；IL-1R

3、N基因由4個外顯子和3個內含子構成。自1986年Yasulii Furutani等報道IL-1A基因全序列至今，在IL-1A基因中已發(fā)現(xiàn)了91個SNP位點。目前國內外對IL-1A基因SNP的研究報道較少，且只限于少數(shù)幾個SNP位點與某些疾病相關性的研究。有關中國北方漢族人群IL-1A基因多態(tài)性分布及其法醫(yī)學應用尚無報道。 本研究選擇IL-1A基因中3個SNP位點(-889、+4716和+4845)，調查其在中國遼寧地區(qū)漢族人群中

4、的遺傳多態(tài)性，并探討其法醫(yī)學意義，為人類遺傳學和法醫(yī)學提供有價值的參考數(shù)據(jù)。 材料和方法 一、材料：234例靜脈抗凝血采自遼寧地區(qū)漢族健康無血緣關系的獻血者；68個二代三口家系由中國醫(yī)科大學法醫(yī)血清學教研室提供。 二、主要試劑及儀器：蛋白酶K(Takara)；Taq DNA聚合酶，10×Buffer(Takara)；dNTP(Takara)；DNAMarker(北京欣源公司)；丙烯酰胺，N，N-亞甲基雙丙烯酰胺(

5、MERCK)；瓊脂糖，三羥甲基氨基甲烷(華美生物工程公司)。 DNA擴增儀(UNOⅡ，BIOMETRA)；電泳儀(Pharmacia，EPS 500/400)；電泳槽(北京六一儀器廠，DYY-Ⅲ 33A型)；紫外投射光源(Pharmacia LKB，2011 MacroVUE)；高速臺式離心機(上海醫(yī)用分析儀器廠，TGL-16G)。 三、方法：應用雙向等位基因特異性擴增技術(Bi-PASA)結合聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染的

6、方法調查IL-1A基因中3個SNP位點(-889、+4716和+4845)的多態(tài)性分布狀況，并進行Hardy-Weinberg平衡檢驗；應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行x<'2>檢驗比較不同人群頻率分布差異； Odelberg法計算個人識別率(DP)和父權排除概率(PE)，Nei和Chakraborty法計算雜合度(H)。 結果 IL-1A基因-889位點檢出C/T兩種等位基因，等位基因頻率分別為0.9017和0.09

7、83。2個等位基因組成CC、CT和TT三種基因型，基因型頻率分別為0.8077、0.1880和0.0043。 IL-1A基因+4716位點檢出A/C兩種等位基因，等位基因頻率分別為0.6325和0.3675。AA、AC和CC三種基因型的頻率分別為0.4188、0.4274和0.1538。 IL-1A基因+4845位點檢出T/G兩種等位基因，等位基因頻率分別為0.0983和0.9017。TT、TG和GG三種基因型的頻率分別

8、為0.0043、0.1880和0.8077。 在所分析的68個二代三口家系中，有4個家系不符合生物學遺傳關系。其中2個家系的生物學父子關系在3個SNP位點的分析中均被否定；另外2個家系只被+4716一個SNP位點否定了其生物學父子關系。 討論 本研究采用雙向等位基因特異性擴增(Bi-PASA)方法檢測了IL-1A基因中3個SNP位點的多態(tài)性。本研究根據(jù)IL-1A基因3個SNP位點在中國遼寧漢族群體中等位基因頻率的

9、分布狀態(tài)，計算出各位點的雜合度、個人識別幾率、多態(tài)性信息量和非父排除概率。結果表明IL-1A-889和+4845 SNP位點的個人識別幾率和非父排除率分別為0.3123和0.0807，屬于中鑒別能力類遺傳標記；+4716 SNP位點雜合度為0.4274、多態(tài)性信息量為0.4649、個人識別幾率和非父排除概率為0.6182和0.1784，屬于高鑒別能力類遺傳標記。通過對68個二代三口家系進行上述3個SNP位點的遺傳規(guī)律調查，在4個被否定了

10、生物學親子關系家系中，2個家系由3個SNP位點共同排除父權；另外2個家系在一個位點排除父子關系，其余64個家系均未否定生物學親子關系。此結果與其他檢測系統(tǒng)的結果相同，表明本研究方法可以應用于法醫(yī)學鑒定。 本研究還將中國遼寧地區(qū)漢族群體-889 SNP位點的頻率分布與14個不同種族的群體進行比較，結果發(fā)現(xiàn)遼寧漢族與中國湖北漢族、廣西壯族、亞洲的朝鮮和韓國人群的頻率分布無顯著性差異(P>0.05)，而與歐洲、美國白人以及美國黑人群體

11、具有顯著性差異(P<0.05)。 結論 1、雙向等位基因特異性擴增(Bi-PASA)技術具有簡單、快速、特異性好、效能高的特點，在法醫(yī)學研究和鑒定中具有較高的應用價值。 2、IL-1A基因-889、+4716和+4845三個SNP位點在遼寧漢族群體中具有遺傳多態(tài)性，且在該人群中分布達到了Hardy-Weinberg平衡。 3、IL-1A基因-889、+4845 SNP位點屬于中等鑒別能力遺傳標記，+471