以熒光顯微技術研究細胞內囊泡轉運和胞吐.pdf

1、細胞分泌過程中囊泡的胞內轉運和胞吐過程是細胞生命活動的基礎，和許多疾病密切相關。深入研究囊泡胞內轉運和胞吐過程不僅有助于了解細胞生命活動的機理，也有助于為疾病治療提供新的思路和途徑。隨著熒光顯微技術和活體細胞熒光標記技術的發(fā)展，直觀觀察和研究囊泡的胞內轉運和胞吐過程已經(jīng)成為國際上的一個研究熱點。研究囊泡的胞內轉運和胞吐涉及到活體細胞熒光顯微成象、連續(xù)在線采樣、數(shù)字圖象模式識別方法和計算機仿真等諸多領域的問題。本文使用熒光顯微技術研究了全

2、細胞范圍內囊泡的三維動態(tài)過程以及囊泡的胞吐，內容如下：1)討論了三維反卷積熒光顯微技術。該技術以寬場熒光顯微鏡和光學切片方法采集樣本的三維圖象，然后使用反卷積圖象恢復算法有效地去除三維圖象中的焦外光干擾。三維熒光反卷積顯微技術能夠實現(xiàn)低熒光漂白和低光毒性的三維成象，為長時程對活體細胞連續(xù)成象提供了堅實的基礎。2)以三維反卷積熒光顯微技術觀察了胰腺β細胞內的分泌囊泡和NK細胞內的分泌性溶酶體的空間分布。實驗結果說明三維反卷積熒光顯微技術適

3、用于觀察活體細胞。3)討論了三維單微粒跟蹤技術。研究了基于質心計算和高斯擬合的三維單微粒跟蹤技術，說明三維單微粒跟蹤技術能夠以亞象素級精度監(jiān)測單個熒光微粒的三維位移。并定量分析了三維成象中的衍射限制對單微粒跟蹤的影響。4)將三維反卷積熒光顯微技術和單微粒跟蹤技術有機地結合起來，成功跟蹤了PC12細胞全細胞范圍內單個分泌囊泡的三維動態(tài)過程。將細胞膜附近囊泡(相距細胞膜小于1μm)分為一組，細胞內其它囊泡分為另一組，深入研究并比較了不同生理