青蒿琥酯對(duì)肺纖維化大鼠中IV型膠原、MMP-2-9和TIMP-1-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：肺纖維化（pulmonary fibrosis）是一種以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂為病理特征的疾病，臨床上已有藥物如糖皮質(zhì)激素聯(lián)合免疫抑制劑、氧療法等對(duì)其進(jìn)行治療，但是發(fā)現(xiàn)這些治療方法對(duì)根除這類疾病無顯著功效。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察青蒿琥酯對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化過程中 IV型膠原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和 TIMP-2表達(dá)的影響，為青蒿琥酯抗肺纖維化的作用機(jī)制提供理論依據(jù)，為阻滯肺纖維化提供新的思路。
　　方法：

2、實(shí)驗(yàn)分為兩部分。
　　第一部分為探討青蒿琥酯對(duì)成纖維化大鼠肺組織IV型膠原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表達(dá)的影響及其機(jī)制。雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組（NS組）、博萊霉素+生理鹽水模型組（BLM組）、博來霉素+青蒿琥酯治療組（AT組）和生理鹽水+青蒿琥酯對(duì)照組（AC組），各組大鼠隨機(jī)分為10只/組。NS組和AC組氣管內(nèi)一次性給生理鹽水約0.3 ml。BLM和AT氣管內(nèi)一次性給博來霉素5 mg/

3、kg。次日NS組、BLM組每日腹腔注射生理鹽水1 ml,AT組和AC組每日腹腔注射青蒿琥酯10 mg/100g。觀察大鼠的一般狀態(tài)。于28天后處死大鼠，計(jì)算肺系數(shù)，取肺組織進(jìn)行HE染色，進(jìn)行肺泡炎評(píng)分和肺纖維化評(píng)分，用Western blot檢測(cè)MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和IV型膠原表達(dá)情況。
　　第二部分為探討青蒿琥酯對(duì)成纖維化大鼠肺成纖維細(xì)胞（lung fibroblast, LF）中IV型膠原、MMP

4、-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2表達(dá)的影響及機(jī)制。在這一階段的試驗(yàn)中，肺纖維化大鼠模型和分組與第一部分的肺纖維化模型相同，取雄性SD大鼠40只，各組大鼠隨機(jī)分為10只/組，進(jìn)行LF提取，細(xì)胞培養(yǎng)至第四代行免疫組織化學(xué)染色鑒定 Vimentin蛋白的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè) MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和IV型膠原表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　第一部分：（1）NS組和AC組大鼠一般狀態(tài)良好。BLM

5、組和AT組大鼠狀態(tài)多有下降，大鼠毛發(fā)蓬松，無光澤，呼吸急促，肺部啰音明顯且持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，精神萎靡，進(jìn)食明顯減少，活動(dòng)少，體重減輕。但AT組大鼠狀態(tài)較BLM組大鼠狀態(tài)稍有好轉(zhuǎn)。（2）NS組和AC組大鼠肺組織顏色紅潤(rùn)，質(zhì)地柔軟，可見少量散在出血。BLM組大鼠肺組織呈蒼白色，表面凹凸不平，質(zhì)地較硬，有些大鼠可見肺大泡。AT組大鼠肺組織與BLM組相比，肉眼未見明顯差異。BLM組的肺系數(shù)明顯高于其他三組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）HE染色顯示 N

6、S組和 AC組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，可見大量的含氣肺泡，見少量肺泡炎癥細(xì)胞沉積，肺泡壁無明顯增厚。少量膠原沉著。BLM組肺泡結(jié)構(gòu)明顯破壞，出現(xiàn)大范圍的肺實(shí)變。大量膠原沉積。AT組中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較BLM組減少，可見灶狀的纖維化區(qū)域但病變程度較BLM組輕。（4）肺泡炎評(píng)分和肺纖維化評(píng)分中，BLM組明顯高于其他三組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（5）BLM組大鼠TIMP-1、TIMP-2、IV型膠原蛋白的表達(dá)顯著高于其他三組。而MMP-2和MMP-9蛋

7、白在BLM組的表達(dá)高于NS組和AC組，但低于AT組。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　第二部分：（1）LF細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，有偽足，胞體明亮，有較長(zhǎng)的突起，胞核呈卵圓形，位于細(xì)胞中央，呈放射狀或柵欄狀排列，12h左右貼壁，2-3d左右伸展，4-5d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，7-8d后生長(zhǎng)接近融合，并彼此連接成網(wǎng)狀。（2）免疫組化結(jié)果可見，Vimentin蛋白表達(dá)于LF細(xì)胞質(zhì)中，呈黃棕色網(wǎng)狀形態(tài)分布，視野內(nèi)幾乎均呈陽性表達(dá)。陽性表達(dá)率為99.4％（3）B

8、LM組大鼠TIMP-1、TIMP-2、IV型膠原mRNA的表達(dá)顯著高于其他三組。而 MMP-2和 MMP-9 mRNA在BLM組的表達(dá)高于NS組和AC組，但低于AT組。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　（1）青蒿琥酯可以抑制博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化，能夠減輕大鼠肺泡炎、減少膠原的沉積和降低肺纖維化嚴(yán)重程度。
　?。?）青蒿琥酯對(duì)肺纖維化大鼠肺組織中 IV型膠原、TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)有一定的下調(diào)作用，但對(duì)M