2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的:
  腫瘤免疫療法已逐漸成為治療惡性腫瘤的一種新型療法,其中TLR激動劑因其具有強(qiáng)有力的誘發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答的潛能,在腫瘤免疫治療中發(fā)揮著重要作用。此外,多個TLR的同時刺激具有誘發(fā)多重TLR信號協(xié)同作用的潛力,近來在腫瘤免疫治療中受到格外關(guān)注。MBP和HP-NAP分別是來源于微生物的TLR4和 TLR2的激動劑,其免疫調(diào)節(jié)功能已被證實。在本研究中,通過融合表達(dá)TLR2/TLR4激動劑rMBP-NAP,在B16黑色素瘤皮下移

2、植瘤模型中對其抗腫瘤作用及作用機(jī)制進(jìn)行了初步研究,以期在獲得新型 TLR2/TLR4激動劑的同時,對同步激活多重TLR通路在腫瘤免疫治療中的潛力進(jìn)行初步的探討。
  方法:
  1.構(gòu)建原核表達(dá)載體pET22b(+)-NAP,誘導(dǎo)表達(dá)純化HP-NAP蛋白,并依據(jù)實驗室前期方法純化MBP和rMBP-NAP蛋白,并利用內(nèi)毒素清除柱去除蛋白中殘余的內(nèi)毒素。
  2.建立B16皮下移植瘤模型,并進(jìn)行MBP、HP-NAP和rMB

3、P-NAP給藥處理,期間監(jiān)測腫瘤生長狀況,繪制腫瘤體積生長曲線。
  3.最后一次給藥結(jié)束后一天,處死小鼠,稱取腫瘤重量,計算腫瘤抑制率, H&E染色檢測腫瘤壞死,CD34免疫組化染色檢測腫瘤血管生成。
  4.熒光定量 PCR檢測脾細(xì)胞中DC成熟相關(guān)分子基因表達(dá)量,ELISA檢測脾細(xì)胞分泌IL-12的能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測CD11c+ DC的比例,評估TLR激動劑促進(jìn)脾臟中DC成熟的效果。
  5.流式細(xì)胞術(shù)檢測脾細(xì)胞

4、中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比例,ELISA檢測細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2分泌量,評估TLR激動劑對脾臟中T細(xì)胞活化的作用。
  6.熒光定量 PCR檢測腫瘤組織中 DC成熟相關(guān)分子及 T細(xì)胞趨化因子CXCL-9和CXCL-10基因表達(dá)量,免疫組化檢測腫瘤組織中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞浸潤,ELISA和熒光定量PCR檢測腫瘤組織中細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2表達(dá)量,熒光定量PCR檢測穿孔素和顆粒酶B基因表達(dá)量。評估在腫

5、瘤微環(huán)境中TLR激動劑誘導(dǎo)DC的成熟及增強(qiáng)T細(xì)胞活化的作用。
  結(jié)果:
  1. TLR激動劑MBP、HP-NAP及rMBP-NAP均能顯著性抑制B16皮下移植瘤的生長,其抑瘤率分別達(dá)到53.07%、47.86%、77.27%,并能夠促進(jìn)腫瘤組織壞死,抑制腫瘤血管生成。其中TLR2/TLR4激動劑rMBP-NAP表現(xiàn)出增強(qiáng)的抗腫瘤效果。
  2.與單一的MBP和HP-NAP相比,TLR2/TLR4激動劑rMBP-NA

6、P能夠顯著性上調(diào)脾臟中DC成熟相關(guān)分子如CD40、CD80、CD83、MHC II等的表達(dá),顯著性促進(jìn)細(xì)胞因子IL-12的分泌,顯著增加脾細(xì)胞中CD11c+DC、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例,促進(jìn)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的分泌。即rMBP-NAP能夠激活脾臟中固有和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。
  3.與單一的MBP和HP-NAP相比,TLR2/TLR4激動劑rMBP-NAP誘導(dǎo)腫瘤組織中DC的成熟,促進(jìn)CD4+T細(xì)胞和CD8+T

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