CUMS引起大鼠學習記憶力下降與CaMKK_-AMPK通路介導的過度自噬相關.pdf

1、目的：（1）觀察慢性不可預知溫和應激（CUMS）對大鼠學習記憶力、海馬CA1區(qū)細胞CaMKKβ/AMPK通路和自噬的影響。（2）觀察CaMKKβ/AMPK通路對CUMS大鼠學習記憶力和海馬CA1區(qū)自噬的影響。（3）探討慢性不可預知溫和應激引起大鼠學習記憶力下降的可能機制。
　　方法：選取40只健康的SD雄性大鼠，然后隨機分四組：正常對照組（Control組）、慢性不可預知溫和應激組（CUMS組)、慢性不可預知溫和應激+STO-60

2、9組（STO-609組）、慢性不可預知溫和應激+Compound C組（Compound C組）。每組10只，除正常對照組外，其它3組均給予慢性不可預知溫和應激處理，時間共4周，從應激第1天起，CUMS組、STO-609組、Compound C組大鼠分別給予10 ulPBS(溶劑)、10 ulSTO-609(CaMKK?抑制劑)、10 ulCompound C（AMPK抑制劑）通過側(cè)腦室套管注入側(cè)腦室，每天每只大鼠只注射1次，注射速度維

3、持在0.6ul/min,連續(xù)側(cè)腦室給藥4周。每組大鼠在應激第4周第一天開始進行水迷宮實驗。實驗完成后，各組大鼠先斷尾采血，通過采用酶聯(lián)免疫技術對血漿皮質(zhì)酮濃度進行檢測，然后斷頭取出海馬，通過HE染色對海馬CA1區(qū)形態(tài)學進行觀察，采用TUNEL染色方法對細胞凋亡水平進行觀察，應用透射電鏡對自噬體、線粒體及溶酶體情況進行觀察，通過Western-Blot法對CaMKKβ、P-AMPK（磷酸化的AMPK）、Beclin1、LC3、p62蛋白的

4、表達進行檢測。
　　結(jié)果：（1）大鼠血漿皮質(zhì)酮濃度檢測：跟正常對照組大鼠相比較，CUMS組大鼠血漿中皮質(zhì)酮濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。跟CUMS組大鼠相比較，STO-609組、Compound C組大鼠血漿中皮質(zhì)酮含量均無明顯差異（P>0.05)。（2）水迷宮實驗結(jié)果：跟正常對照組相比較發(fā)現(xiàn)，CUMS組逃避潛伏期時間大幅上升，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。跟CUMS組相比較，STO-609組、Compoun

5、d C組大鼠逃避潛伏期都明顯縮短，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（3）病理學檢測結(jié)果：HE結(jié)果：跟正常對照組大鼠相比較發(fā)現(xiàn)，CUMS組海馬CA1區(qū)結(jié)構不清，細胞排列混亂無序，細胞數(shù)目顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。跟CUMS組相比較發(fā)現(xiàn)，STO-609組、Compound C組海馬CA1區(qū)細胞數(shù)量都顯著增加，具有顯著性差異（P<0.05）。（4）TUNEL結(jié)果：跟正常對照組大鼠相比較發(fā)現(xiàn)，CUMS組海馬CA1區(qū)細胞出現(xiàn)大

6、量凋亡，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與CUMS組比較，STO-609組、Compound C組大鼠海馬CA1區(qū)凋亡細胞均顯著降低，具有顯著性差異（P<0.05）。（5）透射電鏡：跟正常對照組大鼠相比較發(fā)現(xiàn)，CUMS組海馬CA1區(qū)自噬體數(shù)量大幅上升，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與CUMS組比較，STO-609組和Compound C組大鼠海馬CA1區(qū)自噬體數(shù)量均顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（6）Western-

7、Blot檢測結(jié)果：與正常對照組大鼠相比較，CUMS組的CaMKKβ、P-AMPK、Beclin1、LC3-Ⅱ的表達量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而p62蛋白表達量明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與CUMS組比較，STO-609組和Compound C組P-AMPK、Beclin1、LC3-Ⅱ的表達量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），p6