bFGF單抗聯(lián)合紫杉醇(Taxol)抑制MCF-7及耐藥株MCF-7-Taxol的增效作用的分子機(jī)制.pdf

1、目的：本研究主要目的是：
　　1.研究bFGF單抗聯(lián)合紫杉醇（Taxol）抑制MCF-7細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制；
　　2.探討bFGF單抗聯(lián)合Taxol對(duì)耐藥株MCF-7/Taxol的增效作用的分子機(jī)制。
　　方法：制備腹水型bFGF單抗，體外培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞和乳腺癌耐紫杉醇的耐藥株MCF-7/Taxol，實(shí)驗(yàn)中將兩種細(xì)胞均分為四組，Control組、bFGF單抗組、Taxol組及 bFGF單抗+Taxol

2、組處理，并用相應(yīng)的藥物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。
　?。?）用CCK-8法檢測(cè)bFGF單抗聯(lián)合Taxol對(duì)MCF-7，MCF-7/Taxol細(xì)胞的增殖抑制率，比較四組間的細(xì)胞增殖抑制率。
　?。?）使用流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染檢測(cè)MCF-7，MCF-7/Taxol細(xì)胞在不同藥物組處理下的細(xì)胞凋亡的情況。
　?。?）使用Western blot檢測(cè)與MCF-7和MCF-7/Taxol增殖，凋亡相關(guān)信號(hào)通路蛋白

3、的表達(dá)變化用以揭示bFGF單抗聯(lián)合Taxol抑制MCF-7的分子機(jī)制以及對(duì)于MCF-7/Taxol的增效作用。用Western blot檢測(cè)了蛋白R(shí)af-1，Erk，p-Erk，JNK，p-JNK，STAT3，p-STAT3，Caspase3，cleaved-Caspase3，PARP，cleave-PARP，Bax，Bcl的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　（1）CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，M

4、CF-7/Taxol后對(duì)其增殖抑制率分別提高了13.40％-36.50%；9.56%-26.87%，聯(lián)合用藥能增強(qiáng)對(duì)細(xì)胞抑制作用。
　?。?）流式結(jié)果顯示bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，MCF-7/Taxol后PI，F(xiàn)ITC雙陽性率分別提高了17.10%-23.20%；20.00%-22.70%，表明聯(lián)合能增強(qiáng)對(duì)凋亡促進(jìn)作用。
　?。?）Western Blot結(jié)果顯示MCF-7，MCF-7/Taxol中MabD9

5、+Taxol組能明顯下調(diào)Raf-1，p-Erk，p-STAT3，Bcl-2，Caspase3，并上調(diào)p-JNK，Bax，cleavedCaspase3，cleavedPARP，其中Raf-1在MCF-7/Taxol中表達(dá)量較MCF-7明顯下降。
　　結(jié)論：
　　（1）bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，MCF-7/Taxol后對(duì)其增殖抑制率分別提高了13.40%-36.50%；9.56%-26.87%，聯(lián)合用藥能增強(qiáng)對(duì)

6、細(xì)胞抑制作用。結(jié)果顯示bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，MCF-7/Taxol后PI，F(xiàn)ITC雙陽性率分別提高了17.10%-23.20%；20.00%-22.70%，表明聯(lián)合能增強(qiáng)對(duì)凋亡促進(jìn)作用。
　?。?）本研究揭示了bFGF單抗聯(lián)合Taxol抑制MCF-7的如下機(jī)制：加強(qiáng)了對(duì)Erk/MAPK通路的抑制，并加強(qiáng)上調(diào)p-JNK，下調(diào)p-STAT3的表達(dá)量，引起B(yǎng)cl-2表達(dá)量下調(diào)，Bax表達(dá)上調(diào)，Caspase3，cle

7、aved Caspase3，cleaved PARP表達(dá)變化引起細(xì)胞凋亡。
　?。?）bFGF單抗聯(lián)合Taxol抑制MCF-7紫杉醇耐藥株(MCF-7/Taxol)增效作用的分子機(jī)制與作用于親本株的機(jī)制基本一致，同樣是抑制Erk/MAPK通路，并上調(diào)p-JNK，下調(diào)p-STAT3的表達(dá)量，引起B(yǎng)cl-2表達(dá)量下調(diào)，Bax表達(dá)上調(diào)，Caspase3，cleaved-Caspase3，cleaved-PARP表達(dá)變化引起細(xì)胞凋亡，bF