還少丹對(duì)雌、雄老齡大鼠抗衰老作用的探究.pdf

1、中醫(yī)學(xué)因其獨(dú)特的理論體系，在抗衰老領(lǐng)域占重要位置。很多學(xué)者開(kāi)始對(duì)中醫(yī)抗衰老古方進(jìn)行研究和重新利用。但中藥復(fù)方的抗氧化、抗衰老機(jī)制研究仍然欠深刻，有很多未知需要探討。本文以復(fù)方中藥“還少丹”為試驗(yàn)藥物，分別在細(xì)胞和動(dòng)物水平探究還少丹抗氧化、抗衰老的作用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴細(xì)胞水平：取4月齡SPF級(jí)(Specific pathogen Free, SPF) SD大鼠(Sprague Dawley)14只(雌、雄各半)，制備大

2、鼠血清，即載還少丹血清（載藥血清）和大鼠空白血清；載藥血清、空白血清、胎牛血清以及含有維生素C(VC)的載藥血清和胎牛血清分別用于配制相應(yīng)的培養(yǎng)基，用于體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞(Rat osteoblast, ROBs)；分別檢測(cè)不同培養(yǎng)環(huán)境中ROBs的增殖、周期及mTOR(Mammalian target of rapamyein)的表達(dá)量，以期探討還少丹對(duì)ROBs的作用。⑵動(dòng)物水平：取20月齡SPF級(jí)SD大鼠28只(雌、雄各半)，隨機(jī)分為雄

3、性對(duì)照組(MC）、雄性還少丹組(MH)、雌性對(duì)照組(FC)、雌性還少丹組(FH)；給還少丹組灌胃還少丹水溶液，對(duì)照組灌胃等量的無(wú)菌水，每天灌胃一次，每7天稱重一次，并記錄；第60天，一次灌兩倍劑量的還少丹，末次灌胃1.5-2h后，腹腔注射戊巴比妥鈉，等深度麻醉時(shí)：從心臟取血制備血清，檢測(cè)血清中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase SOD）的活性和丙二醛（Malondialdehyde MDA）的含量；依次打開(kāi)胸腔、腹

4、腔和顱腔，依次取出心、肝、脾、肺、腎、胃、胰、腦等，迅速放入冰生理鹽水中清洗，用濾紙吸干生理鹽水后稱重、記錄，以大鼠臟器重(g)/體重(100 g)，計(jì)算各臟器系數(shù)；分別稱取大鼠肝臟和大腦0.1 g（5份），按10％（W:V）加入生理鹽水，超聲破碎肝和腦組織，制備10%組織勻漿，然后離心并取上清檢測(cè)肝臟及腦中SOD的活性和MDA的含量；把心、肝、脾、腎、胃、腦組織置于4%甲醛中固定，做石蠟切片并HE染色(hematoxylin-eosi

5、n staining)，光學(xué)顯微鏡下觀察臟器形態(tài)。⑶實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在細(xì)胞水平，還少丹有促進(jìn)ROBs增殖、增加mTOR表達(dá)量、調(diào)控細(xì)胞周期的作用。在動(dòng)物水平，還少丹對(duì)老齡SD大鼠的體重沒(méi)有影響；還少丹能顯著提高雄性的臟器系數(shù)而對(duì)雌性臟器系數(shù)作用不明顯；還少丹顯著增強(qiáng)了雄性血清、肝臟及腦中SOD的活性并同時(shí)降低MDA的含量；但對(duì)于雌性，SOD的活性在血清、肝臟和腦勻漿中均沒(méi)有顯著變化，也僅在血清中檢測(cè)到MDA含量的顯著降低；從組織切片染色的