兔脛骨延長(zhǎng)對(duì)半月板病理組織學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：使用自行設(shè)計(jì)的微型外固定架行兔脛骨截骨肢體延長(zhǎng)，觀察在不同延長(zhǎng)長(zhǎng)度和不同礦化時(shí)間對(duì)半月板的病理組織學(xué)的影響，為認(rèn)識(shí)及預(yù)防肢體延長(zhǎng)過(guò)程中的半月板的并發(fā)癥提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：40只成年實(shí)驗(yàn)用白兔，重量2.5-3.0Kg，隨機(jī)挑選入組，對(duì)照組4只，實(shí)驗(yàn)組36只。A組為對(duì)照組（僅截骨不延長(zhǎng),截骨后延長(zhǎng)開始前進(jìn)行取材）；實(shí)驗(yàn)組按照不同延長(zhǎng)長(zhǎng)度隨機(jī)分為B組（延長(zhǎng)1cm，約為肢體長(zhǎng)度10％），C組（延長(zhǎng)2cm組，約為肢體長(zhǎng)度20%）

2、，D組（延長(zhǎng)3cm組，約為肢體長(zhǎng)度30%）；各組內(nèi)根據(jù)礦化期不同時(shí)間各分為3個(gè)亞組，即延長(zhǎng)終止日（礦化期0天），延長(zhǎng)終止后30日（礦化期30天），和延長(zhǎng)終止后60日（礦化期60天），共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組各4只動(dòng)物。兔麻醉下行右脛骨近端截骨自制外固定架固定術(shù)。術(shù)后自由活動(dòng)，抗生素使用3-5天。截骨后第6日進(jìn)行延長(zhǎng)，以1mm/2-3次/天的速度均勻延長(zhǎng)兔脛骨，根據(jù)分組相應(yīng)延長(zhǎng)1、2、3cm。相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)分別取材內(nèi)側(cè)半月板，取材前拍攝實(shí)驗(yàn)側(cè)正位X

3、片，觀察脛骨延長(zhǎng)區(qū)的骨痂生成及重塑愈合、骨延長(zhǎng)長(zhǎng)度、膝關(guān)節(jié)間隙及關(guān)節(jié)是否脫位等。取材的組織放入盛有10%福爾馬林液的封閉容器內(nèi)，制備石蠟包埋切片進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色、蘇木精-伊紅（HE）染色和Ⅱ型膠原的免疫組化染色，觀察半月板的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化、軟骨細(xì)胞組織學(xué)改變及蛋白多糖分泌情況，檢測(cè)半月板內(nèi)Ⅱ型膠原在延長(zhǎng)期、礦化期不同時(shí)相的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、順利完成兔脛骨截骨延長(zhǎng)步驟。X線示截骨端之間的距離隨著延長(zhǎng)期進(jìn)展而增大；延

4、長(zhǎng)區(qū)的骨痂影響隨礦化期延長(zhǎng)逐漸密度增高，后期可見骨痂愈合，肢體整體力線正常；各組均達(dá)到相應(yīng)的延長(zhǎng)長(zhǎng)度、延長(zhǎng)幅度越大關(guān)節(jié)間隙減小越明顯,其余未見異常。
　　2、大體觀察:A組（正常對(duì)照組）:正常膝關(guān)節(jié)半月板為白色半透明狀,質(zhì)韌有彈性,表面光滑。
　　B組半月板與對(duì)照組相比無(wú)明顯改變，半月板向周邊輕微位移，C組半月板外觀稍蒼白,游離緣可見輕微磨損,彈性變差,表面可見輕微壓縮痕跡和劃痕,光澤欠均勻，與脛骨平臺(tái)關(guān)節(jié)軟骨無(wú)明顯粘連,向

5、脛骨平臺(tái)周圍明顯移動(dòng)。
　　D組半月板顏色灰白，表面有劃痕，明顯向周邊移動(dòng)，邊緣毛糙且厚度變薄,滑膜輕度增生及粘連,半月板與脛骨平臺(tái)無(wú)明顯粘連。
　　3、隨著延長(zhǎng)幅度增加，半月板內(nèi)的陷窩中細(xì)胞失去正常形態(tài)、軟骨陷窩減小，半月板的膠原纖維排列松散紊亂,并有部分纖維發(fā)生中斷。在延長(zhǎng)1、2cm組，隨礦化時(shí)間延長(zhǎng)，軟骨的形態(tài)有一定恢復(fù)，半月板內(nèi)纖維排列無(wú)明顯變化。延長(zhǎng)3cm組，軟骨細(xì)胞退化更加明顯，隨礦化時(shí)間延長(zhǎng)，軟骨細(xì)胞未見恢復(fù)跡

6、象，半月板內(nèi)纖維排列更加松散，纖維中斷現(xiàn)象增加且無(wú)明顯恢復(fù)跡象。
　　4、甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色：各組半月板內(nèi)軟骨細(xì)胞周圍的甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色均呈現(xiàn)隨著延長(zhǎng)幅度增加染色范圍減小，染色程度降低，在延長(zhǎng)停止后隨礦化期延長(zhǎng)均逐步加深，延長(zhǎng)1、2cm組在礦化期時(shí)染色范圍逐步擴(kuò)大，深染程度增加，甚至高于正常，染色程度逐步恢復(fù)；延長(zhǎng)3cm組，染色范圍及深染程度持續(xù)處于低水平并且恢復(fù)較慢。
　　結(jié)論：

7、>　　1、使用自行設(shè)計(jì)的單臂外固定架輔助延長(zhǎng)兔肢體的模型,能很好的模擬臨床中人體肢體延長(zhǎng)的過(guò)程，其膝關(guān)節(jié)生物力學(xué)與人體相似，可獲得可靠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　2、半月板在肢體延長(zhǎng)過(guò)程中現(xiàn)不同程度的病理組織學(xué)改變，低幅度肢體延長(zhǎng)時(shí)，半月板損傷較小，軟骨細(xì)胞退化不明顯，纖維排列較緊密。隨著延長(zhǎng)幅度增加半月板形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷明顯加重，軟骨細(xì)胞退化明顯，膠原排列更加紊亂。
　　3、在適當(dāng)長(zhǎng)度內(nèi)緩慢肢體延長(zhǎng)導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)內(nèi)半月板的損害是暫時(shí)而可逆的，