河北省出血熱疫區(qū)鼠類攜帶漢坦病毒基因型別及病原特征研究.pdf

1、目的：了解腎綜合征出血熱（Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome， HFRS）疫區(qū)鼠類攜帶漢坦病毒（Hantavirus，HV）的基因特點和變異情況。揭示河北省出血熱疫區(qū)鼠類攜帶HV的基因型別，為防治HV相關(guān)疾病提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.根據(jù)河北省HFRS的流行強(qiáng)度和地區(qū)分布情況，選擇石家莊某縣級市、保定某縣級市、滄州某縣、邯鄲某縣、唐山某縣和承德某縣6個縣區(qū)為重點研究區(qū)域；

2、　　2.分別在6個區(qū)域的居民區(qū)和野外采用夾夜法捕鼠，總結(jié)各區(qū)域HV宿主動物的密度及鼠種構(gòu)成；
　　3.鼠肺勻漿處理，并提取總RNA；
　　4.采用TaqMan探針法多重?zé)晒舛縍T-PCR技術(shù)對8種HV分兩組進(jìn)行檢測，漢灘病毒（Hantaan virus, HTNV）、漢城病毒（Seoul virus， SEOV）、普馬拉病毒（Puumala virus，PUUV）、多布拉伐（Dobrava virus， DOBV）為第一組

3、，圖拉病毒（Tula virus，TULV）、黑河渠病毒（Black creek canal virus，BCCV）、安第斯病毒（Andes virus，ANDV）、辛諾畢斯病毒（Sin Nombre virus，SNV）為第二組；
　　5.采用一致簡并雜合寡核苷酸引物（Consensus Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primers，CODEHOP）RT-PCR檢測鼠肺中HV的基因型別；

4、r>　　6.挑選核酸檢測結(jié)果為HV陽性的鼠肺標(biāo)本，進(jìn)一步利用針對Gc基因片段而設(shè)計的SEOV特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核酸序列測定；
　　7.對序列進(jìn)行同源性分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　結(jié)果：
　　1.2015~2016年兩年6個區(qū)域的野外平均鼠密度為0.44％，居民區(qū)平均鼠密度為2.77%，居民區(qū)鼠密度高于野外（χ2=317.995，P<0.001）。2015~2016年冀南地區(qū)（石家莊某縣級市、邯鄲某

5、縣）的平均鼠密度為5.36%，冀中地區(qū)（保定某縣級市、滄州某縣）的平均鼠密度為2.58%，冀東地區(qū)（唐山某縣）鼠密度為1.92%，冀北地區(qū)（承德某縣）鼠密度為6.18%。經(jīng)卡方檢驗，可認(rèn)為冀北和冀南地區(qū)的鼠密度高于冀中和冀東地區(qū)（χ2=336.29，P<0.001）。
　　居民區(qū)春季鼠密度高于秋季或基本與秋季持平。
　　2.2015~2016年6個區(qū)域共捕鼠1228只，經(jīng)分類鑒定隸屬于4屬4種，分別為大鼠屬的褐家鼠1043只

6、，小家鼠屬的小家鼠179只，倉鼠屬的大倉鼠5只，姬鼠屬的黑線姬鼠1只。居民區(qū)的優(yōu)勢鼠種為褐家鼠，占居民區(qū)總捕獲數(shù)的84.12%；野外優(yōu)勢鼠種為褐家鼠，占野外總捕獲數(shù)的92.50%?？傮w來看，河北省6個區(qū)域的優(yōu)勢鼠種為褐家鼠。
　　3.對1228份標(biāo)本進(jìn)行TaqMan探針法多重?zé)晒舛縍T-PCR檢測，共檢出35份HV陽性。
　　4.對1228份標(biāo)本采用CODEHOP體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中29份鼠肺標(biāo)本出現(xiàn)特征條帶。

7、　　5.鼠帶毒率為2.85%，毒種均為SEOV。其中居民區(qū)共檢測鼠肺1108份，陽性33份，鼠帶毒率為2.98%；野外共檢測鼠肺120份，陽性2份，鼠帶毒率為1.67%，居民區(qū)鼠帶毒率高于野外（χ2=37.78，P<0.05）。35份HV陽性鼠肺標(biāo)本中褐家鼠29份，小家鼠5份，帶毒率分別為2.78%、2.79%，還有1份為黑線姬鼠（由于標(biāo)本量太小不宜計算帶毒率）。小家鼠和野棲型的黑線姬鼠攜帶了SEOV，證明該毒種出現(xiàn)了“宿主溢出”現(xiàn)象。

8、
　　在不同區(qū)域方面，冀南地區(qū)帶毒率為2.13%，冀中地區(qū)帶毒率為0.34%，冀東地區(qū)帶毒率為17.81%，冀北地區(qū)帶毒率為5.88%。經(jīng)卡方檢驗結(jié)果顯示（χ2=2513.13，P<0.001）：冀東地區(qū)鼠帶毒率高于其他地區(qū)。
　　6.對35份HV陽性鼠肺標(biāo)本采用針對Gc基因片段的SEOV型特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，8份標(biāo)本的擴(kuò)增產(chǎn)物在預(yù)期位置出現(xiàn)了目的條帶。
　　7.對整理獲得的7份L片段進(jìn)行核酸擴(kuò)增及同源性比較，7

9、份標(biāo)本之間核酸序列同源性為94.0%~98.3%，7份標(biāo)本與浙江省SEOV的ZT10株及韓國SEOV的80-39株的同源性較高。L片段系統(tǒng)發(fā)育樹顯示7份標(biāo)本均處于SEO型HV的分支上，親緣關(guān)系較近，由此可判斷7份標(biāo)本均屬于SEO型HV。
　　8份 Gc片段核酸擴(kuò)增及同源性比較結(jié)果顯示，8份標(biāo)本間核酸序列同源性為98.1%~99.7%，與SEOV型北京市BjHD01株，河北省HBQ20株、HBQ43株，山東省GM04-38株、ZB8