大鼠血漿中滅多威的分析及其代謝物的質(zhì)譜研究.pdf

1、目的：本文建立了血漿中滅多威的固相萃取—高效液相色譜(SPE—HPLC)快速定性定量分析方法，并利用固相萃取—高效液相色譜—質(zhì)譜(SPE—HPLC—MS)法對大鼠血漿中的滅多威及其代謝物進(jìn)行了研究。 方法： 1.以空白大鼠血漿添加滅多威標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)物安定標(biāo)準(zhǔn)品對血漿樣品的前處理方法、儀器測試條件、特異性、回收率、靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、線性關(guān)系、穩(wěn)定性進(jìn)行全面考察，建立血漿中滅多威的SPE—HPLC快速定性定量分析方法；

2、HPLC—MS法在大鼠血漿中檢出了滅多威及其代謝物。 2.采用HPLC法：測定不同時間點(diǎn)大鼠血漿中滅多威的藥物濃度。按照滅多威5mg/kg給雄性大鼠灌胃后，收集0.33h，0.67h，1h，2h，3h，5h，7h，9h，11h，13h，15h，17h，19h，21h，23h的大鼠血漿，SPE—HPLC法測定血漿中滅多威，并對24h內(nèi)大鼠血漿中滅多威濃度的變化規(guī)律進(jìn)行了描述；模擬法醫(yī)鑒定，按照滅多威50mg/kg給雄性大鼠灌胃后，

3、將大鼠尸體室溫存放72h，取心血，SPE—HPLC法檢測大鼠血漿中滅多威的含量；色譜柱：kromasil C18柱(4.6mm i．d．×250mm，5μm粒徑)；流動相：甲醇：水=40：60(V/V)；檢測波長：235nm；安定作為內(nèi)標(biāo)。 3.采用HPLC—MS法：分析大鼠血漿中滅多威及其代謝物。模擬法醫(yī)鑒定，按照滅多威50mg/kg給雄性大鼠灌胃后，將大鼠尸體室溫存放72h，取心血，SPE—HPLC—MS法檢測大鼠血漿中的滅

4、多威及其代謝物。色譜柱：Xterra C18。柱(2.1mm i．d．×150mm，5μm粒徑)；流動相：甲醇：水=15：85(V/V)；檢測波長：235nm；質(zhì)譜：采用電噴霧電離方式(ESl+)，毛細(xì)管電壓：3.0kV；離子源溫度：110℃：干燥氣溫度：300℃；干燥氣流速：450L/h；掃描范圍：50～300m/z。 結(jié)果：1.SPE—HPLC法測得滅多威在血漿中的線性范圍是0.1μg/ml～20μg/ml(r=0.9993

5、，P<0.001)，血漿中的檢測限是0.03μg/ml(S/N=3)，日內(nèi)、日間精密度的RSD值分別在8.33％與11.11％以內(nèi)，日內(nèi)、日間準(zhǔn)確度值分別在90％與120％之間，回收率值在88％±4.4％以上；并且在灌服大量的滅多威引起中毒死亡72h后的大鼠血漿中仍能檢測到滅多威。2.SPE—HPLC—MS法發(fā)現(xiàn)，給藥后的大鼠血漿中，除滅多威原體外，還有一種代謝物，并測得其準(zhǔn)分子離子峰及其各級碎片離子，經(jīng)與對照品比較及質(zhì)譜斷裂規(guī)律推斷滅