羅格列酮對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)大鼠肺纖維化的治療作用及信號(hào)機(jī)制.pdf

1、目的：特發(fā)性肺纖維化（Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一種進(jìn)展性、致命性的彌漫性肺間質(zhì)疾病，近年來(lái)發(fā)病率和死亡率明顯升高，以成纖維細(xì)胞過(guò)度增殖、細(xì)胞外基質(zhì)成分堆積為主要特征，但目前其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明且缺乏有效治療。本研究初步探討羅格列酮（Rosiglitazone,RSG）是否通過(guò)活化過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體γ（PPAR-γ），進(jìn)而抑制成纖維細(xì)胞增生及轉(zhuǎn)化，減少膠原合成和沉積，發(fā)揮治療肺

2、纖維化的作用；是否通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，延緩肺纖維進(jìn)程。同時(shí)初步探討細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）信號(hào)途徑是否參與了羅格列酮治療肺纖維化過(guò)程。
　　方法：健康雄性Wistar大鼠54只，體重（125±5）g，選用隨機(jī)數(shù)字表法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為3組，對(duì)照組（Control組）、博萊霉素組(BLM組)、博萊霉素+羅格列酮組(BLM+RSG組)，每組18只。大鼠經(jīng)10％水

3、合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉后，仰臥位固定于鼠臺(tái)上，常規(guī)頸部皮膚消毒，行頸正中切口，逐層分離組織并暴露氣管，BLM組、BLM+RSG組大鼠氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素(5mg/kg)建立大鼠肺纖維化模型，Control組注入等體積生理鹽水，注射后立即將動(dòng)物直立并左右旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)分布均勻。造模24小時(shí)后給予BLM+RSG組大鼠RSG（3mg/kg.d）灌胃，其余2組灌入等體積生理鹽水。于第7天、14天、28天，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組隨機(jī)取

4、出6只大鼠，經(jīng)10%水合氯醛（3ml/Kg）腹腔麻醉后，雙側(cè)頸總動(dòng)脈放血處死，沿劍突正中快速剪開胸骨，打開胸腔，充分暴露雙肺并分離氣管及雙肺，右肺中葉肺組織供組織病理學(xué)觀察（HE染色，Masson染色），肺泡炎和肺纖維化程度用Szapiel法進(jìn)行分級(jí)；右上葉肺組織行Real time RT-PCR測(cè)定PPAR-γ、α平滑肌激動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原及caspase-3 mRNA

5、的表達(dá)；右肺下葉肺組織行Western blot測(cè)定磷酸化-細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（P-ERK）蛋白表達(dá)量。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.肺組織病理結(jié)果：7天、14天、28天，對(duì)照組大鼠肺組織肺泡結(jié)構(gòu)均正常，無(wú)明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)及膠原沉積。BLM組大鼠肺組織7天時(shí)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡炎明顯，14天、28天時(shí)肺泡炎程度減輕，但顯著高于同期Control組，差異有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），14天、28天BLM組大鼠肺組織成纖維細(xì)胞增多并可見小灶樣及片狀藍(lán)染膠原沉積，肺纖維化程度顯著高于Control組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明肺纖維化模型復(fù)制成功。給予RSG治療后，BLM+RSG組大鼠肺組織肺泡炎及肺纖維化程度較同一時(shí)間點(diǎn)BLM組明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.Real time RT-PCR結(jié)果：7天、14天、28天，BLM組大鼠肺組織α-SMA、Ⅰ

7、型膠原、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)均較同期的Control組顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給予RSG治療后BLM+RSG組大鼠肺組織α-SMA、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)較同一時(shí)間點(diǎn)BLM組顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。給予RSG治療后，7天，14天，28天，BLM+RSG組大鼠肺組織PPAR-γmRNA的表達(dá)較同一時(shí)間點(diǎn)BLM組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。7天、14天、28天，BLM+RS

8、G組大鼠肺組織的caspase-3mRNA表達(dá)較BLM組顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.Western blot結(jié)果：7天、14天、28天，BLM組大鼠肺組織P-ERK的表達(dá)較同期的Control組上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；給予RSG治療后BLM+RSG組大鼠肺組織P-ERK表達(dá)均較同期的BLM組下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.在博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維