擬南芥花粉和胚胎兩個(gè)突變體的篩選和分子遺傳研究.pdf

1、通過卡那霉素抗性(由突變體中標(biāo)記基因編碼)非孟德爾分離，從Ds插入的擬南芥突變體庫中篩選到一個(gè)雄配子體發(fā)育突變體：ovpl(over vacuolatedpollen)和一個(gè)早期胚胎發(fā)生突變體eedl(early embryo defect)，我們對這兩個(gè)突變體的表型和相關(guān)基因進(jìn)行了研究。 光學(xué)和電子顯微鏡觀察及細(xì)胞學(xué)分析結(jié)果表明ovp1突變體有約50％的花粉粒在二細(xì)胞時(shí)期已經(jīng)明顯空泡化(over vacuolated)，隨后發(fā)

2、生皺縮并最終敗育。四分體分析和正反交實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明ovpl雜合體是一個(gè)雄配子體致死突變體。反向PCR和序列分析結(jié)果表明Ds插入在At2G01560基因的第一個(gè)外顯子內(nèi)。等位突變體分析和分子互補(bǔ)證明ovpl的表型是由Ds插入該基因引起的。GFP::OVP1融合蛋白顯示OVP1定位于細(xì)胞核上。啟動子-GUS染色、RNA原位雜交實(shí)驗(yàn)表明At2G01560在成熟花粉粒中特異表達(dá)。這些結(jié)果說明OVP1是擬南芥中一個(gè)特異性調(diào)控雄配子體發(fā)育的必須因子

3、。 觀察eedl果莢內(nèi)的彎曲子葉胚時(shí)期的種子，發(fā)現(xiàn)約20％的種子變黃退化。整體透明觀察發(fā)現(xiàn)部分eedl胚胎早期細(xì)胞表現(xiàn)為不正常的細(xì)胞分裂模式，部分胚胎細(xì)胞膨大、細(xì)胞之間聯(lián)系松散，使胚胎形態(tài)不正常。異常胚胎在心形胚前退化，導(dǎo)致種子皺縮變黃。正反交結(jié)果證明eedl是純合胚胎致死的突變體。反向PCR和序列分析結(jié)果表明Ds插入在At2G26120基因的終止密碼子后361bp處。分子互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)表明At2G26120編碼EED1。啟動子-GU