一個(gè)擬南芥花器官發(fā)育突變體的遺傳分析和基因定位.pdf

1、模式植物擬南芥在植物基因組研究中起重要作用。對(duì)擬南芥突變體的鑒定和相關(guān)基因的功能分析是擬南芥功能基因組研究的重要內(nèi)容。本研究旨在對(duì)本實(shí)驗(yàn)室新近獲得的一個(gè)擬南芥花器官發(fā)育突變體進(jìn)行詳細(xì)的遺傳分析,并利用圖位克隆法分離控制突變性狀的基因。
　　 本實(shí)驗(yàn)所研究的突變體3—34來(lái)自擬南芥T—DNA插入突變體系NH(哥倫比亞生態(tài)型)的分離后代。該突變體在植株生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中表現(xiàn)明顯的突變性狀:主莖較細(xì)且短小,有的甚至不能抽薹；葉片顏色較深,

2、苔莖葉細(xì)長(zhǎng)或扭曲；花蕾簇生、較多且多數(shù)發(fā)育不完全；花瓣數(shù)目為兩瓣、三瓣、四瓣和五瓣不等,部分花有雌蕊缺失現(xiàn)象。在T—DNA載體(pBI121)上,35S上下游區(qū)域共設(shè)計(jì)引物四對(duì)引物35s-3/YM14、35s-3/FsaL、CTF/CTR和GFPR/GFPF,來(lái)檢測(cè)載體序列,但PCR結(jié)果均表現(xiàn)為陰性即沒(méi)有檢測(cè)到T—DNA插入。
　　 以Ler-WT為母本,3—34突變體為父本構(gòu)建了有1200個(gè)單株的F2代分離群體。表型分析發(fā)現(xiàn)該

3、群體有234個(gè)突變株,符合單基因隱性突變的遺傳模式。本實(shí)驗(yàn)首先用BSA法對(duì)平均分布于擬南芥5條染色體上的22個(gè)InDel標(biāo)記進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)只有位于第五條染色體上的最后一個(gè)標(biāo)記ciw10在兩個(gè)Bulked池之間出現(xiàn)多態(tài)性,即說(shuō)明ciw10與目標(biāo)基因連鎖。然后在ciw10上下游共開(kāi)發(fā)了17個(gè)InDel標(biāo)記,用42個(gè)正常表型和52個(gè)突變表型組成的F2群體進(jìn)行篩選,將目標(biāo)基因定位于MR11和ciw10之間。用同樣的方法又開(kāi)發(fā)了18個(gè)InDel標(biāo)