核桃青皮中次生物質(zhì)抗病毒活性研究.pdf

1、煙草花葉病毒給煙葉生產(chǎn)造成很大損失，已成為煙草主要病害之一，本文就核桃青皮中次生物質(zhì)對煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)的抑制作用及其抗病毒活性機理進行初步研究，研究結(jié)果如下： (1)以不同溶劑和方法對核桃青皮進行了抗植物病毒物質(zhì)的提取和活性測定，并且通過單因素試驗和正交試驗，以核桃青皮中抗病毒活性物質(zhì)的抑制率為考察指標，對影響提取效果的各因素進行了研究。結(jié)果表明：提取物的抗病毒活性因提取溶劑和提取

2、方法的不同而異。以體積分數(shù)95％乙醇為提取溶劑，冷浸提取物在接種濃度為10mg/mL時，對TMV的抑制率最高，為80.0％。采用冷浸提取時，各因素對核桃青皮抗病毒活性物質(zhì)提取效果的影響程度從高到低依次為：乙醇濃度＞液固比＞提取次數(shù)＞提取時間，確定了優(yōu)化的提取工藝條件為：95％乙醇冷提4次，每次26h，液固比為6：1。 (2)采用活性跟蹤的手段進行核桃青皮中抗煙草花葉病毒活性成分的分離。按照優(yōu)化的提取工藝提取樣品，得核桃青皮粗提物

3、，懸浮于蒸餾水中，依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇為溶劑萃取分離，分別得到石油醚相萃取物、乙酸乙酯相萃取物、正丁醇相萃取物和萃余水相，其中乙酸乙酯相萃取物在接種濃度為10mg/mL時對煙草花葉病毒侵染心葉煙的抑制率最高，為62.71％。該相萃取物經(jīng)多次層析分離和純化得到化合物A，化合物A在接種濃度為5mg/ml時，對TMV侵染心葉煙的抑制率達68.59％，說明化合物A是乙酸乙酯萃取物中的主要抗病毒活性成分之一。 (3)化合物A與T

4、MV混合，鈍化0.5h、1h和2h后采用半葉枯斑法接種，接種濃度為5mg/mL，其抑制率分別為64.97％、68.07％和86.87％。說明化合物A對TMV具有明顯的體外鈍化作用。 (4)防治試驗表明，先涂抹化合物A接種液后接種病毒的抑制率為50.645％，而先接種病毒后涂抹化合物A接種液的抑制率為30.68％。說明化合物A具有預(yù)防TMV初侵染的作用。 (5)化合物A接種普通煙，處理3d、6d、9d和12d后，測定普通煙