人谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶通過調(diào)節(jié)MEKK1活性抑制MEKK1介導(dǎo)的HEK293細(xì)胞凋亡的相關(guān)研究.pdf

1、谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶(G1utathion s-transferase，GST)是細(xì)胞內(nèi)降解生物異源物質(zhì)的一組超家族同工酶。GSTs作為一類II期解毒酶，通過催化還原型谷胱甘肽結(jié)合到內(nèi)源或者外源的親電基團(tuán)上，從而對(duì)胞內(nèi)大分子起保護(hù)作用。此外，GSTs能以配基形式和胞內(nèi)激酶相互作用，從而調(diào)控激酶介導(dǎo)的信號(hào)通路。GSTs可以通過與關(guān)鍵的胞內(nèi)激酶形成配體相互作用從而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，影響細(xì)胞的增殖和凋亡。人谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1(GSTPl)是細(xì)胞

2、內(nèi)降解生物異源物質(zhì)的一組超家族同工酶中的一個(gè)重要的亞型。 MEKKl作為一個(gè)196KD的激酶，參與了JNK信號(hào)通路以及細(xì)胞凋亡過程的調(diào)節(jié)。瞬時(shí)過表達(dá)MEKKl時(shí)，自身會(huì)切割成為一個(gè)91KD的活性片段，引發(fā)凋亡。當(dāng)細(xì)胞暴露在基因損傷類試劑如etoposide刺激時(shí)，MEKKl的Asp874會(huì)被CaSDase切割。切割后釋放出的MEKKl激酶域自身又能進(jìn)一步活化Caspase，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。 課題研究揭示了GSTPl在

3、調(diào)節(jié)MEKKl-MKK7信號(hào)通路中的新功能。在HEK293細(xì)胞中過表達(dá)GSTPl能抑制△MEKKl引發(fā)的細(xì)胞凋亡，過表達(dá)GsTPl同樣可以抑制Etoposide誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。光學(xué)顯微鏡觀測(cè)和AO／EB雙染色結(jié)果均證實(shí)了這種抑制作用的存在。westem方法檢測(cè)下游凋亡信號(hào)caspase-3前體的激活以及PARP的切割情況，和凋亡現(xiàn)象相對(duì)應(yīng)。胞內(nèi)表達(dá)的△MEKKl活性可被過表達(dá)的GSTPl抑制，且呈劑量依賴型。體外誘導(dǎo)表達(dá)純化GsTPl蛋

4、白，用原核表達(dá)的無活性MKK7蛋白作底物，進(jìn)行體外激酶活性分析，結(jié)果顯示MEKKl的活性同樣劑量依賴的被GsTPl抑制。此外，研究發(fā)現(xiàn)，GsTPl的谷胱甘肽結(jié)合活性與這種抑制作用密切相關(guān)。Etoposide誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡已被證實(shí)與MEKKl的激活有關(guān)，由此可見，GSTPl抑制的etoposide引發(fā)的細(xì)胞凋亡很大程度是由于抑制了MEKKl的活性。研究結(jié)果闡明了GsTPl保護(hù)基因損傷類藥物引發(fā)的細(xì)胞凋亡的機(jī)制是通過抑制基因損傷類藥物引發(fā)的