神經(jīng)生長因子對大鼠跨區(qū)穿支皮瓣成活的影響.pdf

1、目的：
　　穿支皮瓣作為創(chuàng)面覆蓋、組織修復(fù)技術(shù)，在臨床上發(fā)揮著舉足輕重的作用。Taylor提出血管體區(qū)(angio some)及Choke Vessels是穿支皮瓣臨床運用的解剖學(xué)基礎(chǔ)，而相鄰血管體間choke vessels的開放及“潛在供區(qū)”有效循環(huán)的建立成為移植后皮瓣遠(yuǎn)端組織成活的關(guān)鍵。在跨區(qū)修復(fù)較大創(chuàng)面時，穿支皮瓣術(shù)中、術(shù)后壞死時有發(fā)生，處理棘手。外科延遲技術(shù)通過多期手術(shù)能夠改善遠(yuǎn)端血管體區(qū)在皮瓣正式切取后的血供，有效擴大

2、皮瓣的修復(fù)面積。目前多數(shù)研究認(rèn)為其機制是促進(jìn)相鄰血管體區(qū)間的choke血管的擴張及側(cè)支循環(huán)的建立。這一過程可被某些藥物、細(xì)胞及其分泌的生化因子加強甚至替代，從而衍生出化學(xué)皮瓣延遲(chemical flap delay)。
　　神經(jīng)營養(yǎng)因子(NGF)是一個多功能多肽分子，可以通過內(nèi)皮祖細(xì)胞酪氨酸激酶受體TrkA途徑觸發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，維持血管內(nèi)皮功能。NGF還直接或者間接調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)促進(jìn)血管生成。此外，內(nèi)皮組細(xì)胞上分布血

3、管生長因子Ⅱ型受體KDR，VEGF與其結(jié)合后發(fā)揮血管生成的作用。NGF能夠上調(diào)KDR的表達(dá)，與VEGF有協(xié)同作用，此為血管生成的另一途徑。然而目前NGF能否通過以上可能的機制影響皮瓣choke區(qū)微血管形態(tài)變化及潛在供區(qū)微循環(huán)建立，從而替代外科延遲手術(shù)改善大面積皮瓣成活，還不十分清楚。基于以上分析，本研究篩序并建立動物模型，通過顯微CT評價NGF對SD大鼠背部跨區(qū)供血穿支皮瓣顯微血管形態(tài)變化的影響，并對其機制進(jìn)行探討，為提高臨床皮瓣成活提

4、供理論支持。
　　方法：
　　第一部分：利用Micro-CT重建技術(shù)觀察神經(jīng)生長因子對大鼠跨區(qū)穿支皮瓣血管形態(tài)變化的影響
　　成年SD大鼠40只，隨機分為實驗組和對照組。通過大體解剖篩選合適的大鼠背部跨區(qū)供血穿支皮瓣模型。切取面積約3cm×10cm的背部跨區(qū)皮瓣。實驗組皮下注射NGF溶液（10nmol·m1-1·kg-1）;對照組同法注射0.1M磷酸鹽緩沖溶液(1ml/kg)。術(shù)后第3、7天氧化鉛-明膠溶液血管灌注后，

5、利用顯微CT技術(shù)，獲取血管體三維形態(tài)，M atlable軟件分析血管容積及總長度等計量參數(shù)變化。術(shù)后第7天統(tǒng)計皮瓣存活面積。
　　第二部分：神經(jīng)生長因子對大鼠跨區(qū)穿支皮瓣成活初步機制研究
　　成年SD大鼠44只，隨機分為實驗組和對照組。切取面積約3cm×10cm的背部跨區(qū)皮瓣。實驗組皮下注射NGF溶液(10nmol·ml-1·kg-1);對照組同法注射0.1M磷酸鹽緩沖溶液(1ml/kg)。術(shù)后第3、7天局部取材運用West

6、ern Blot技術(shù)半定量檢測VEGF及CD34蛋白含量;術(shù)后第7天免疫組化染色觀測血管生長因子受體(KDR)及NGF受體(TrkA)的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.設(shè)計以髂腰動脈為單穿支血管蒂的跨三個血管體區(qū)的大鼠背部皮瓣模型，具有恒定的壞死面積。
　　結(jié)果：顯示，血管形態(tài)學(xué)分析示NGF和時間因相互作用增加血管容積(F=33.304，P＜0.05)及總長度(F=8.493，P=0.01);實驗組皮瓣成活面積明顯大于對照

7、組(P＜0.05)。
　　2.NGF明顯促進(jìn)皮瓣微血管VEGF及CD34蛋白分泌。第3天，VEGF表達(dá)實驗組與對照組無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.088);實驗組CD34表達(dá)明顯高于對照組(P=0.004);第7天，兩種蛋白分子表達(dá)，實驗組顯著均優(yōu)于對照組(P＜0.05)。NGF能夠誘導(dǎo)皮瓣微血管TrkA的陽性表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　NGF能增加choke區(qū)微血管的密度及長度，促進(jìn)的跨區(qū)供血皮瓣的成活面積;其機制可能是NG