硫代二半乳糖苷治療子宮內(nèi)膜異位癥的實驗研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)是指子宮內(nèi)膜基質(zhì)及上皮在宮腔以外的位置生長，是一種依賴雌激素的慢性炎癥性疾病。EMs具有侵襲性、復(fù)發(fā)性等典型的惡性腫瘤生物學(xué)特征，提示二者可能存在相同的發(fā)病機制。血管形成及炎癥在EMs發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的作用。
　　半乳糖凝集素-1（Gal-1）在惡性腫瘤中得到廣泛研究，其在惡性腫瘤組織中高表達，可分布于細胞內(nèi)外發(fā)揮功能，參與細胞粘附、血管形成等生理病理學(xué)過程。硫代二半乳糖苷(TDG)作為其特異性的抑制

2、劑，在多種疾病中得以證明可以負向調(diào)節(jié)血管形成、改善炎癥狀態(tài)、平衡免疫失穩(wěn)。
　　本研究通過建立EMs大鼠模型，研究Gal-1在EMs大鼠異位內(nèi)膜中的表達，同時觀察TD)G對EMs的治療作用，并以EMs血管形成及炎癥為主要切入點，初步探索TDG治療EMs的作用機制。
　　目的：
　　1.建立大鼠內(nèi)異癥模型，研究Gal-1在異位內(nèi)膜中的表達。
　　2.用藥后觀察TDG對EMs的治療作用。
　　3.研究藥物對異位

3、灶血管生成及炎癥的影響。
　　4.研究藥物對Gal-1/ERK信號通路的作用。
　　5.研究藥物對性激素水平的影響。
　　方法：
　　1.陰道涂片觀察大鼠動情周期。
　　2.在大鼠動情期采用自體腹壁移植法建立模型。假手術(shù)組僅去掉左側(cè)子宮角。28天后再次開腹觀察。造模成功標準：①大體標準：腹壁移植物生長為橢圓囊泡狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)含清亮或咖啡色液體，表面及周圍有血管形成。②病理學(xué)標準：腹壁移植物有子宮內(nèi)膜上皮及基質(zhì)結(jié)

4、構(gòu)。
　　3.將造模大鼠隨機分為模型組及給藥組，取模型組異位移植物及假手術(shù)組右側(cè)子宮內(nèi)膜，分別采用免疫組化、熒光實時定量聚合酶鏈鎖反應(yīng)、免疫印跡(WB)觀察Gal-1在組織中的表達。給藥組隨機分為PBS對照組、低劑量TDG組（20mg/kg體重）、高劑量TDG組（80mg/kg體重），連續(xù)給藥兩周，每兩天一次，后再次開腹觀察異位內(nèi)膜生長情況。
　　4.測量異位病灶體積大小，觀察給藥前后體積變化，WB檢測Bcl-2表達，TUN

5、EL染色凋亡細胞。
　　5.WB分析血管生成素-2（Ang-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP9)、Elisa檢測血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達。
　　6.WB分析Gal-1與磷酸化ERK的表達。
　　7.放射免疫法測定大鼠血清中的性激素水平。
　　結(jié)果：
　　1.所有大鼠均呈現(xiàn)每4-5天1次的連續(xù)的動情周期變化。
　　2.33只大鼠中，94％的大鼠肉眼見異位種植物生長為囊泡狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)含清亮

6、或咖啡色液體，表面及周圍見血管形成，鏡下可見上皮層和基質(zhì)層。
　　3.Gal-1在異位內(nèi)膜及假手術(shù)組正常內(nèi)膜中均只在基質(zhì)層中表達;異位內(nèi)膜中，Gal-1主要表達在異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)及細胞外基質(zhì)，正常內(nèi)膜中，Gal-1主要表達于子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的胞核中。
　　4.異位內(nèi)膜中Gal-1mRNA及蛋白相對表達量均高于正常內(nèi)膜，二者均P＜0.05。
　　5.給藥后，對照組大鼠的內(nèi)異癥病灶與給藥前體積相比，無顯著性差異（P

7、＞0.05);低劑量組和高劑量組體積均縮小，給藥前后體積差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)。
　　6.Bcl-2的表達隨藥物濃度升高而降低，高劑量組、低劑量組分別與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01），但高、低劑量組之問差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。TUNEL染色三組之間高劑量組凋亡指數(shù)明顯高于對照組(均P＜0.01)。
　　7.與對照組相比，Ang-2、MMP9的表達隨藥物濃度升高而逐漸降低，二者均僅高劑量

8、組與對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。血清TNF-α濃度三組之間僅高劑量組與對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　8.給藥組各組Gal-1的蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），ERK磷酸化的下降程度在三組之間僅高劑量組與對照組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　9.用藥14天后，給藥組各組間E2，P，F(xiàn)SH，LH無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.大鼠EMs模型異位病

9、灶存在Gal-1高表達，可作為有效的研究模型。
　　2.運用TDG后病灶縮小，抗凋亡基因Bcl-2表達減少，細胞凋亡增多，提示TDG治療EMs有效。
　　3.TDG減少Ang-2、MMP9的表達，降低血清中TNF-α的濃度，可能對內(nèi)異癥中的血管形成及炎癥有抑制作用。
　　4.TDG可能通過占據(jù)Gal-1的糖結(jié)合域位點來抑制Gal-1的功能，從而影響ERK的磷酸化。
　　5.TDG對性激素水平無影響，對下丘腦-垂體