Angiopoietin-1及L-mimosine對糖尿病大鼠腎臟固有細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景及目的：
　　糖尿病腎病（DN）發(fā)生發(fā)展與腎臟微血管異常和慢性缺氧密切相關(guān)，而腎臟固有細(xì)胞凋亡在其進程中扮演重要作用。前期實驗已證實促血管生成素-1（Ang-1）和抑制低氧誘導(dǎo)因子（HIF）降解可減輕糖尿病大鼠腎臟血管生成和缺氧相關(guān)因子異常表達，改善糖尿病腎臟微血管病變和缺氧狀態(tài)。本研究旨在從細(xì)胞凋亡角度評估Ang-1、含羞草素（L-mimosine，HIF降解抑制劑）對糖尿病腎臟保護性作用。
　　方法：
　　構(gòu)建

2、Ang-1基因重組腺病毒載體（Ad-Ang-1）。采用腹腔一次性注射鏈脲菌素誘導(dǎo)SD大鼠糖尿病模型。設(shè)置正常對照組（N組）、DN組（D組）、空載腺病毒組（K組）、Ang-1干預(yù)組（A組）、L-mimosine干預(yù)組（L組）及Ang-1+L-mimosine聯(lián)合干預(yù)組（AL組）。成模8W后，K組大鼠經(jīng)陰莖靜脈注射空白腺病毒載體(3×108pfu/只)，A組大鼠經(jīng)陰莖靜脈注射Ad-Ang-1（3×108pfu/只），L組大鼠經(jīng)腹腔注射L-m

3、imosine（50mg/kg，隔日一次），AL組聯(lián)用Ad-Ang-1及L-mimosine。在12W、16W末收集大鼠血、尿標(biāo)本常規(guī)生化檢測，同時處死大鼠，取出腎臟組織， HE及PAS染色觀察腎臟病理，Western blot測定凋亡相關(guān)蛋白（cleaved CASP3、CASP3、BAX、BCL-2）的表達變化，TUNEL法觀察腎臟固有細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1.血糖、24h尿蛋白：5個糖尿病模型組血糖、24h尿

4、蛋白均顯著高于N組（P<0.05），其中AL、L組24h尿蛋白低于D、A組（P<0.05）。
　　2.血肌酐、尿素：5個糖尿病模型組血肌酐、尿素水平較N組不同程度上升，且3個藥物干預(yù)組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），其中血肌酐水平與D組亦無明顯差異，而12w時血尿素水平卻較D組升高（P<0.01）。
　　3.腎臟病理：5個糖尿病模型組可見不同程度的腎小球變形增大、系膜基質(zhì)積聚、細(xì)胞總數(shù)增多、部分球囊擴張、腎小管管腔擴張

5、及腎小管間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤，3個藥物干預(yù)組病理改變相對減輕。
　　4.腎組織細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白：①與N組相比，5個糖尿病模型組cleaved CASP3蛋白表達均明顯上調(diào)（P<0.01），而CASP3蛋白表達均明顯下調(diào)（P<0.01）。3個藥物干預(yù)組cleaved CASP3蛋白表達顯著低于D組（P<0.01），而CASP3蛋白表達顯著高于D組（P<0.01），且3個藥物干預(yù)組間cleaved CASP3、CASP3蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差

6、異（P>0.05）。②5個糖尿病模型組BAX蛋白表達較N組均明顯上調(diào)（P<0.01），其中3個藥物干預(yù)組BAX蛋白表達顯著低于D組（P<0.01），且3個藥物干預(yù)組間BAX蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。③5個糖尿病模型組BCL-2蛋白表達較N組均顯著下調(diào)（P<0.05），其中3個藥物干預(yù)組BCL-2蛋白表達顯著高于D組（P<0.05），且3個藥物干預(yù)組間BCL-2蛋白表達無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。④5個糖尿病模型組BAX/B

7、CL-2比值較N組均明顯上調(diào)（P<0.01），其中3個藥物干預(yù)組BAX/BCL-2比值低于D組（P<0.01），且3個藥物干預(yù)組間BAX/BCL-2比值無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　5.腎組織細(xì)胞凋亡率：細(xì)胞凋亡主要表現(xiàn)在腎小管上皮細(xì)胞，其次系膜細(xì)胞；5個糖尿病模型組細(xì)胞凋亡率較N組均明顯升高（P<0.01），其中3個藥物干預(yù)組細(xì)胞凋亡率顯著低于D組（P<0.01），且3個藥物干預(yù)組間細(xì)胞凋亡率無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

8、
　　6.Pearson相關(guān)性分析：Cleaved CASP3、BAX的表達及BAX/BCL-2比值與腎臟固有細(xì)胞凋亡率呈顯著正相關(guān)（r=0.963、0.927、0.962，P<0.01），而CASP3、BCL-2的表達與腎臟固有細(xì)胞凋亡率呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.967、-0.940，P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　Ang-1和或L-mimosine可降低糖尿病大鼠腎臟固有細(xì)胞凋亡，且與改善細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達相關(guān)