2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本實驗以體外培養(yǎng)永生代人系膜細胞為研究對象,觀察緩激肽(bradykinin,BK)對高糖誘導(dǎo)的細胞產(chǎn)生結(jié)締組織生長因子(connectivetissue growth factor,CTGF)、纖連蛋白(fibronectin,F(xiàn)N)及C-Jun氨基末端激酶(C-JunNH<,2>-terminal kinase,JNK)通路活化的影響,采用BK-B<,2>受體阻斷劑、JNK通路阻斷劑探討B(tài)K對CTGF和FN的影響與JNK通路的

2、相關(guān)性,以闡明BK對腎纖維化的作用及其機制,為臨床腎纖維化的預(yù)防、治療提供新的思路和方法。 方法: 1.為了觀察BK不同濃度對高糖誘導(dǎo)的細胞的影響,系膜細胞用不同濃度的BK(0,10,100,1000ng/ml)孵育15分鐘后和高糖(30mmol/l)共同孵育48小時,用RT-PCR法檢測細胞CTGFmRNA和FNmRNA的表達。 2.為了觀察BK作用不同時間對高糖誘導(dǎo)的細胞的影響,用相同濃度的BK(100ng/

3、ml)孵育細胞15分鐘后和高糖(30mmol/l)共同孵育24h、48h、72h,用RT-PCR法檢測細胞CTGFmRNA和FNmRNA的表達。 3.為了觀察BK對高糖誘導(dǎo)細胞磷酸化JNK蛋白的影響,用同濃度BK(100ng/ml)孵育細胞15分鐘后和高糖(30mmol/l)共同孵育30分鐘,用Western Blotting法檢測JNK磷酸化蛋白的瞬間表達。 4.用BK-B<,2>受體阻斷劑HOE-140(Iumol/

4、L)和JNK通路阻斷劑SP-600125(10umol/l)孵育細胞15min后,加入BK(100ng/ml)孵育15 min,再加入高糖(30mmol/l),分別用RT-PCR法測CTGF mRNA及F N mRNA的表達和用Western Blotting法測磷酸化JNK蛋白的表達量。細胞分為正常葡萄糖濃度的對照組、高糖組、BK不同濃度加高糖組、BK-B<,2>受體阻斷劑加BK加高糖組、JNK通路阻斷劑加BK加高糖組。 結(jié)果

5、: 1.BK隨濃度的增加對高糖誘導(dǎo)的細胞表達CTGFmRNA的抑制作用逐漸增強,且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01):而使用BK-B<,2>受體阻斷劑后,這種抑制作用減弱,與BK加高糖組比表達量增多,但仍低于高糖組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);即BK通過B2受體不能完全抑制高糖誘導(dǎo)細胞CTGF的表達。 2.同濃度BK與高糖共同作用細胞48h、72h時,細胞CTGFmRNA的表達量均較相對應(yīng)的高糖組減少,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.

6、01);BK加高糖組在24h、48h、72h表達量隨時間增加逐漸減少,組間比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01);即同濃度BK在24h、48h、72h對高糖誘導(dǎo)細胞CTGF mRNA的表達量有抑制的作用,抑制作用呈時間依賴性。 3.BK不同濃度加高糖組作用48h,組間比及與高糖組比,F(xiàn)NmRNA的表達量無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);加入BK-B<,2>受體阻斷劑后,與未加入阻斷劑的BK加高糖組及高糖組比,也無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);

7、即BK不同濃度在48h對高糖誘導(dǎo)細胞的FNmRNA的表達量無影響。 4.BK加高糖組在24h、48h與相應(yīng)高糖組比FNmRNA的表達量無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),而72h表達量減少,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);BK加高糖組在72h FNmRNA表達量較24h、48h明顯減少,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。72h時加入BK-B<,2>受體阻斷劑后,BK對高糖誘導(dǎo)的細胞表達FNmRNA的抑制作用減弱,但仍低于高糖組,有統(tǒng)計學(xué)差異

8、(P<0.05)。即BK在24h、48h對高糖誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生FN無明顯抑制作用,而72h有明顯抑制作用。 5.高糖組JNK磷酸化蛋白表達量明顯高于對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01);BK加高糖組較高糖組減少,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01);加入BK-B<,2>受體阻斷劑后,BK對高糖誘導(dǎo)細胞表達JNK磷酸化蛋白的抑制作用減弱,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01):使用JNK通路阻斷劑后,JNK磷酸化蛋白表達量明顯減少,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0

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