無指盤臭蛙皮表金黃桿菌分離鑒定及其胞外蛋白酶研究.pdf

1、從無指盤臭蛙表皮中分離到一株具有很強胞外蛋白水解酶活性的菌株CW-E2。通過形態(tài)學、化學成分、生理生化和16S rDNA序列分析確定CW-E2的分類地位；并深入研究該菌株蛋白水解酶活力及其相關特性，最終確定該酶為黃質金黃桿菌來源的金屬蛋白酶。 CW-E 2革蘭氏染色反應呈陰性，菌體短桿狀，無鞭毛，透射電鏡觀察，茵體寬0.5-0.7μm，長1.1-1.3μm，菌落呈圓形，邊緣光滑，直徑1-1-5mm，并且相互粘連，表面光滑并突起，

2、產生黃色素，有金黃色光澤。茵體無運動性，細胞長有周身菌毛，不產生孢子，好氧，化能異養(yǎng)型。 用微生物biolog GN2和API 20NE系統(tǒng)測定生理生化結果為：該菌株能很好的利用D-果糖、D-葡萄糖、D-半乳糖等單糖為唯一碳源生長，并能夠利用D-果糖、D-麥芽糖、D-海藻糖等發(fā)酵產酸，具有過氧化氫酶Bβ-半乳糖苷酶，苯丙氨酸脫羧酶等活性；但沒有鳥氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶，DNA酶和脲酶等活性；不能還原硝酸鹽和亞硝酸鹽；能夠強烈的

3、液化分解白明膠；有酪氨酸水解酶活性，能夠水解吐溫80。呼吸鏈主要醌種類是六碳烷基側鏈的甲基奈醌(MK-6)。該菌株無Na<'+>、維生素等其它特殊營養(yǎng)要求，能生長于0-6％NaCl鹽濃度范圍內，其中1％濃度的NaCl是最佳的鹽離子生長條件。在LB平板上能產生一種不能擴散的黃色素fleximbin。菌株溫度范圍是5-42℃，最適生長溫度是30-35℃；能夠在麥康凱培養(yǎng)基上生長；不能水解纖維素；對于羧芐青霉素、四環(huán)素、強力霉素、慶大霉素、青

4、霉素G、卡那霉素、萬古霉素、紅霉素、利福平、新霉素、鏈霉素和氯霉素敏感；但對于氨芐青霉素、林肯霉素和多粘菌素具有較高的耐受性。測定CW-E 2的G+C mol％含量為37.2％。 CW-E 2的主要脂肪酸是i-C15：0；i-C17：1ω9c；和i-C17：03-OH。16S rDNA序列同源性分析表明，CW-E 2與Cgleum．ATCC 35910T和C.indologenes ATCC 29897T菌株序列同源性均為93.

5、9％，與菌株C.joostei LMG 182/2T的序列同源性為94.9％。 通過形態(tài)學、生理生化、脂肪酸和16s rDNA序列同源性多相分析，最終確定CW-E2的分類地位為：纖維粘菌-黃桿菌-類桿菌(CFB)門，黃桿菌綱(Flavobacteria)，黃桿菌目(Flavobacteria)，黃桿菌科(Flavobacteriaceae)，金黃桿菌屬(Chryseobacterium)的一個新種。并將其命名為黃質金黃桿菌(Ch

6、ryseobacterium．flavum)。對其胞外蛋白酶活性進行了比較深入的研究。 該菌能在以酪蛋白為底物的蛋白酶檢測固體培養(yǎng)基上形成明顯的水解暈圈，證明該菌具有很強的蛋白酶水解酶活力。通過研究證實：該菌的胞外蛋白酶活力在對數期以前隨著細菌細胞濃度的增大不斷增強，在對數生長末期約14h左右酶活達到最大；該酶的最適作用溫度為50℃；適當濃度和特定種類的金屬離子能夠促進該酶的酶活；微量(2.5mM)金屬離子螯合劑EDTA便可對該