人卵泡液及阿魏酸鈉在牛卵母細胞體外成熟中的應用研究.pdf

1、研究目的：利用屠宰黃牛卵巢，采集卵巢表面2～6mm卵泡卵母細胞 1．研究人卵泡液作為牛卵母細胞體外成熟液的可行性： 2．研究人卵泡液滅活、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)體積對牛卵母細胞體外成熟的影響。 3．研究在實驗室自配成熟液(常規(guī)成熟液)中添加阿魏酸鈉對牛卵母細胞體外成熟的影響。 研究方法： 1.291個未成熟牛卵母細胞隨機分為2組，分別采用人卵泡液和常規(guī)成熟液進行成熟培養(yǎng)，比較兩種培養(yǎng)液的成熟率的差異。

2、 2.1 724個未成熟牛卵母細胞隨機分為3組，常規(guī)成熟液為對照組，滅活人卵泡液與不滅活人卵泡液作為實驗組，比較三組間成熟率的差異。 2.2 542個未成熟牛卵母細胞均采用人卵泡液為培養(yǎng)液，隨機分為4組，分別采用37.5℃、38℃、38.5℃、39℃培養(yǎng)，其余培養(yǎng)條件相同，比較4組間成熟率的差異。 2.3 478個個未成熟牛卵母細胞均采用人卵泡液為培養(yǎng)液，隨機分為2組，分別采用四孔板和常規(guī)微滴培養(yǎng)，比較兩組間成熟率的

3、差異。 3.855個未成熟牛卵母細胞隨機分為4組，對照組為常規(guī)成熟液，其余三組為添加0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液，培養(yǎng)條件均相同，比較四組間成熟率的差異。 研究結(jié)果： 1.人卵泡液組與常規(guī)成熟液組成熟率分別為58.5％和63.5％，經(jīng)過統(tǒng)計學分析，兩組間成熟率差異沒有顯著性意義(P>0.05)。 2.1 常規(guī)成熟液培養(yǎng)為成熟牛卵母細胞，成熟率為64.7％，滅活卵泡液組成

4、熟率為37.5％，不滅活卵泡液組成熟率為58.8％。滅活卵泡液組成熟率與對照組相比，差異有顯著性意義(P<0.05)；不滅活卵泡液組成熟率與對照組相比，差異沒有顯著性意義(P>0.05)。 2.2 37.5℃培養(yǎng)的牛卵母細胞成熟率為40.7％，38℃培養(yǎng)的牛卵母細胞成熟率為60.7％，38.5℃培養(yǎng)的牛卵母細胞成熟率為58.1％，39℃培養(yǎng)的牛卵母細胞成熟率為54.1％。37.5℃與38℃、38．5℃、39℃相比，成熟率差異均有

5、顯著性意義(P<0.05)：38℃、38.5℃、39℃三組間相比，成熟率間差異均沒有顯著性意義(P>0.05)。 2.3 四孔板培養(yǎng)牛卵母細胞，體外成熟率為62.1％，常規(guī)微滴培養(yǎng)牛卵母細胞，體外成熟率為65.0％，兩組比較，差異沒有顯著性意義(P>0.05)。 3.對照組成熟率為60.1％，含有0.5mg/ml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液成熟率為44.2％，與對照組相比，差異有顯著性意義(P<0.05)。含有1mg/ml阿魏酸

6、鈉的常規(guī)成熟液53.1％，與對照組相比，差異沒有顯著性意義(P>0.05)。含有2mg/ml阿魏酸鈉的常規(guī)成熟液41.6％，與對照組相比，差異有顯著性意義(P<0.05)。 研究結(jié)論： 1.人成熟卵泡液對牛未成熟卵母細胞體外成熟有促進作用，可以作為牛未成熟卵母細胞體外成熟培養(yǎng)液。 2.1 人成熟卵泡液滅活可能會破壞人卵泡液中利于卵母細胞發(fā)育成熟的成分，造成卵母細胞成熟障礙，因此，采用人成熟卵泡液作為牛未成熟卵母細

7、胞體外成熟培養(yǎng)液時，卵泡液無須滅活處理。 2.2 采用人成熟卵泡液作為牛未成熟卵母細胞體外成熟培養(yǎng)液時，培養(yǎng)溫度設置在38℃比較合適。 2.3 采用四孔板覆蓋礦物油培養(yǎng)卵母細胞使卵母細胞密度大且相對集中于培養(yǎng)皿的底部正中間，既有利于觀察，又有利于卵母細胞之間間隙連接，發(fā)揮其旁分泌作用，促進卵母細胞發(fā)育，減少了培養(yǎng)器皿、培養(yǎng)液和試劑的消耗。另外卵母細胞周圍攜帶的大量顆粒細胞足夠滿足卵母細胞IVM的需要，不必另外收集和制備顆