谷氨酰基轉移酶的制備及其作為參考物質特性的研究.pdf

1、隨著人們對酶標準化工作和計量學溯源體系的深入認識，參考方法、參考物質和參考實驗室網(wǎng)絡的結合成為國內外普遍認可的實現(xiàn)酶活性測定標準化的重要途徑，而使用公認的酶校準物作為載體，將測定結果的數(shù)值在參考方法和常規(guī)方法間進行準確性的傳遞是目前酶標準化工作的關鍵環(huán)節(jié)之一。雖然我國的室間及室內質量控制工作在臨床實驗室中已廣泛開展，酶校準品的應用價值也更受關注，但目前我國使用的酶校準品和質控品基本依賴進口，價格昂貴，在不同的測定儀器和試劑上應用時受到互

2、通性限制。所以，對于我國的酶標準化工作來說，實現(xiàn)參考物質的國產(chǎn)化是目前面臨的重要課題。 本文谷氨?；D移酶(GGT，EC2.3.0.2)是從豬腎皮質中提取的。經(jīng)過勻漿，DOC溶解和硫酸銨分級沉淀粗提取，木瓜蛋白酶的消化酶解，再經(jīng)過脫鹽、DEAE陰離子交換層析和Superdex 75 pg凝膠層析，得出高比活高純度的GGT樣品。該樣品應為豬腎皮質全分子的水溶性輕鏈，分子量為21kD，純化后的比活為124U/mg。經(jīng)SDS-PAG

3、E電泳檢驗，為單一條帶，證明樣品高純度。 初步建立了GGT參考測定方法，并對純化后蛋白的保存基質進行了穩(wěn)定性和互通性研究。初步的觀察結果表明，120天內，4℃和-20℃時GGT在CRM基質和自制基質中保持穩(wěn)定，37℃下活性濃度損失均小于5﹪；在人血清基質中4℃保存的樣品40天內活性濃度下降15.2﹪，37℃保存的樣品在15天內活性下降1.9﹪，40天內下降39﹪。在兩種常規(guī)方法和參考方法的比較中，僅CRM基質的高值樣本偏于95