土大黃基源鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、目的：建立傳統(tǒng)鑒別方法、分子生物學(xué)鑒別方法對土大黃藥材進(jìn)行基源鑒定，同時，研究建立土大黃藥材與飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　方法：通過對土大黃文獻(xiàn)調(diào)研，檢索了歷代本草、各地收錄標(biāo)準(zhǔn)及炮制規(guī)范；進(jìn)行實地調(diào)研，采集到3期18地55份（其中用于鑒定研究35份，用于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究20份）土大黃樣品；采用多種手段包括原植物實物鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別及DNA分子鑒別等對土大黃進(jìn)行定性鑒別；首次采用特異性引物 PCR的方法檢測酸模屬多種植物與偽品山大黃。

2、參考各地土大黃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收錄并結(jié)合本省臨床用藥習(xí)慣及制劑用土大黃品種等確定土大黃山西省地方標(biāo)準(zhǔn)的收載品種；采用TLC對其進(jìn)行真?zhèn)蝺?yōu)劣定性鑒別、檢查；采用HPLC對酸模素苷、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚進(jìn)行含量測定；采用中國藥典2015版四部附錄限量檢查法、藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則對水分、灰分等項目進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：⑴通過傳統(tǒng)鑒別與DNA條形碼鑒別相結(jié)合鑒定，結(jié)果表明：35份土大黃樣品中編號2、8、11、13、14、15、18、19、2

3、3、24、25、28、29、30、32、33為巴天酸模；編號3、20、21為皺葉酸模、編號5、6為長刺酸模；編號1、9、12、31為羊蹄；編號4、7為可以確定為酸模屬植物，無法確定種名；編號22、26為齒果酸模；編號10為尼泊爾酸模；編號16、17為銳齒酸模；編號34、35為華北大黃，是土大黃易混偽品，也叫山大黃；編號27樣品DNA提取失敗，分析原因是飲片陳舊；基于酸模屬多種植物的psbA-trnH序列，設(shè)計出一對特異性引物通過聚合酶鏈

4、式反應(yīng)可快速檢測酸模屬多種植物及其偽品。綜合上述鑒定結(jié)果以及參考各地土大黃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收錄并結(jié)合本省臨床用藥習(xí)慣及制劑用土大黃品種等確定山西省地方標(biāo)準(zhǔn)中土大黃基源擬將收載巴天酸模、皺葉酸模和齒果酸模。⑵建立 TLC鑒別及檢查方法。采用薄層層析法分析發(fā)現(xiàn)酸模屬植物均含有大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等成分；同時含有其專屬性成分酸模素苷，不含有土大黃苷，通過檢測后兩種成分可與其偽品山大黃進(jìn)行區(qū)分。為此分別研究建立了鑒別、檢查項。⑶建立HPLC含量測

5、定項。本研究采用依利特Hypersil BDS C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱；以甲醇-0.1％磷酸水梯度洗脫序列為0-14 min（B%為60%→39%），14-15（B%為39%→16%），15-38（B%為16%）；流速：1.0ml/min；檢測波長：225nm，254nm的含量測定方法可以同時測定酸模屬植物酸模素苷、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚四種化學(xué)成分。
　　結(jié)論：①以原植物性狀結(jié)合DNA分子條形碼鑒別，

6、可較好地解決酸模屬植物分類復(fù)雜、鑒定困難的問題。②在含量測定中發(fā)現(xiàn)來源于同科同屬的羊蹄飲片所含蒽醌類成分明顯高于其他幾種酸模屬藥材。這一發(fā)現(xiàn)可以為土大黃與羊蹄分類研究提供實驗依據(jù)。③酸模屬植物無土大黃苷成分，其偽品土大黃含有大量土大黃苷，以此作為土大黃檢查項，可以實現(xiàn)真?zhèn)舞b別；所建立薄層鑒別方法，其圖譜斑點清晰，分離度好；四種指標(biāo)性成分含量測定方法簡便快捷，重復(fù)性、穩(wěn)定性好，加樣回收率符合要求。所建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于土大黃藥材及飲片的質(zhì)量