Ascl2與MicroRNA-200家族在結(jié)直腸癌及癌旁組織的表達(dá)及其相關(guān)性分析.pdf

1、背景和目的:
　　大腸癌的發(fā)病率和死亡率不僅在全球范圍內(nèi)成持續(xù)上漲趨勢(shì)，在我國(guó)其增長(zhǎng)趨勢(shì)更為驚人。目前在臨床上主要還是通過(guò)手術(shù)達(dá)到對(duì)其治愈的目的，但是近五年來(lái)結(jié)腸癌患者的生存率并未達(dá)到人們預(yù)期的程度，探求更好的診斷及治療大腸癌方法已經(jīng)是全球研究的熱點(diǎn)。原位雜交證明Asc12不僅在大腸和小腸隱窩基底和胎盤(pán)中表達(dá)，而且表達(dá)于其他正常組織[1]，過(guò)表達(dá)及基因敲除實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Asc12可以控制腸道干細(xì)胞的命運(yùn)[2]。一些課題組驗(yàn)證Asc12

2、在結(jié)直腸癌細(xì)胞中高表達(dá)[1,3,4]。此外Asc12過(guò)表達(dá)有可能促使干細(xì)胞和祖細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致自我更新而不是分化，并可能影響這些腫瘤臨床行為[4]。因此,Asc12可能是控制結(jié)腸癌細(xì)胞命運(yùn)調(diào)節(jié)因子。MiRNA(小分子核糖核酸)是至關(guān)重要的基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子，它參與胚胎干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物功能，而且也參與上皮向間皮過(guò)渡(EMT)過(guò)程[5]。miRNA-200家族包括5種家族成員，他們分成兩組分別位于兩個(gè)不同基因組區(qū)

3、域。在人體中含有的MicroRNA-200b、-200a和-429的一組(MIR-200B/200A/429)位于1號(hào)染色體，而第二組MicroRNA-200c、-141（MicroRNA-200C/141）則位于12號(hào)染色體，MicroRNA-200b/200c/429擁有相同的堿基排列，MicroRNA-200a/141亦之，兩組基因不同的堿基排列基因僅來(lái)自于一個(gè)核苷酸（AAUACUG為的MicroRNA-200b/200C/429

4、和AACACUG為的MicroRNA-200a/141）。MicroRNA-200家族在脊椎動(dòng)物物種高度保守的，在上皮細(xì)胞中超高表達(dá)。上皮和間充質(zhì)特性之間的可塑性包括Epithelial-Mesenchymal Transition(EMT)和Mesenchyal-Epithelial transition(MET)兩個(gè)過(guò)程的過(guò)渡，它們是胚胎發(fā)生和腫瘤發(fā)生的調(diào)節(jié)中是關(guān)鍵過(guò)程[6]。MicroRNA-200家族、miRNA-155和miR

5、NA-31不僅在胚胎發(fā)育階段，而且在腫瘤發(fā)生都可以調(diào)節(jié)上皮和間充質(zhì)狀態(tài)。這些miRNA也有助于調(diào)節(jié)上皮和間充質(zhì)之間的可塑性[6-9]。最近的研究說(shuō)明EMT與腫瘤細(xì)胞以及MicroRNA-200家族存在特殊聯(lián)系[10-12]。前期我們已經(jīng)在結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞以及HT-29細(xì)胞中驗(yàn)證敲除Asc12后MicroRNA-200家族表達(dá)明顯發(fā)生上調(diào)，同時(shí)驗(yàn)證Asc12和MicroRNA-200家族啟動(dòng)子直接結(jié)合[13]，我們選取結(jié)腸癌患者，并

6、進(jìn)行病理活檢，分別檢測(cè)了Asc12與MicroRNA-200家族成員在結(jié)腸癌組織和癌旁組織中的表達(dá)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Asc12在結(jié)直腸癌組織的表達(dá)顯著高于癌旁組織，MicroRNA-200家族成員在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)低于癌旁組織，而且存在負(fù)調(diào)控關(guān)系。
　　方法:
　　實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)收集的結(jié)腸癌患者的結(jié)直腸癌標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁標(biāo)本中Asc12與MicroRNA-200家族成員的mRNA表達(dá)量，最后用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　Asc12在結(jié)直腸癌組織的表達(dá)顯著高于癌旁組織(P＜0.0001)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MicroRNA-200a在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯低于結(jié)直腸癌旁組織(P=0.0185)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同時(shí)MicroRNA-200b、MicroRNA-200c、MicroRNA-141在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)也均明顯低于結(jié)直腸癌旁組織，P值分別為(P＜0.0001)(P=0.001)(P=0.0028

8、)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MicroRNA-429在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與結(jié)直腸癌旁組織相比無(wú)差異(P=0.2139)。Asc12與MicroRNA-200a在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.336，P=0.013），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同樣的，Asc12與MicroRNA-200b、MicroRNA-200c、MicroRNA-141、Asc12與MicroRNA-429在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)量均呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為(r=-0.2