VEGF及其受體家族、Claudin家族與結(jié)直腸癌關(guān)系研究.pdf

1、背景：大腸癌是大腸粘膜上皮和腺體發(fā)生的惡性腫瘤，主要包括結(jié)腸癌和直腸癌。它是一種常見的惡性腫瘤，是西方國(guó)家人群的主要病死原因之一，同時(shí)，也是我國(guó)人群中最常見的惡性腫瘤之一。而轉(zhuǎn)移性是腫瘤惡性度的重要指標(biāo)，腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，在這一過程中有多個(gè)因素和基因參與了調(diào)控。對(duì)于結(jié)直腸腫瘤而言，研究發(fā)現(xiàn)有多種分子可能參與其發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程。如VEGF蛋白高表達(dá)與大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分期相關(guān)。VEGF蛋白在大腸癌中的表達(dá)顯著

2、高于正常組織的表達(dá)；VEGF蛋白高表達(dá)與大腸癌病理分化程度不相關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分期相關(guān)。而Claudin家族成員對(duì)大腸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移也起到很重要的作用。 目的：本研究旨在研究中國(guó)人群中，VEGF家族及其受體與Claudin家族成員與結(jié)直腸癌的關(guān)系。 方法：通過收集中國(guó)人群的結(jié)直腸癌患者手術(shù)切除的腫瘤與癌旁組織，采用熒光定量PCR檢測(cè)了不同VEGF家族成員及受體VEGFA、VEGFB、VEGFC、KDR、

3、FLT1以及Claudin家族成員CLDN1、CLDN3、CLDN4、CLDN7在腫瘤與癌旁組織中的表達(dá)差異。為了從蛋白水平進(jìn)一步驗(yàn)證第一部分的分析結(jié)果，選擇了20例樣本的腫瘤與癌旁組織的石蠟切片進(jìn)行免疫組化分析，針對(duì)表達(dá)差異最為顯著的兩個(gè)基因，采用CLDN1與CLDN7抗體進(jìn)行雜交分析。為了從染色體水平尋找這些表達(dá)差異的基因是否在不同個(gè)體間存在多態(tài)性差異，篩選了CLDN1、CLDN7與FLT1這三個(gè)基因的8個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。

4、 結(jié)果：熒光定量PCR的結(jié)果顯示除了KDR基因外，各個(gè)基因都呈現(xiàn)出與不同因素的聯(lián)系，包括各個(gè)分組中腫瘤中和癌旁組織的表達(dá)差異、整體樣本中腫瘤和癌旁的表達(dá)差異、還有組間腫瘤表達(dá)水平的差異。整體樣本中，F(xiàn)LT1與CLDN1則整體上在腫瘤組織中的表達(dá)顯著高于癌旁；CLDN3、CLDN4、CLDN7在腫瘤組織中的表達(dá)均顯著低于癌旁組織中的表達(dá)。VEGFB在M1分組中腫瘤組織中的表達(dá)顯著性高于MO組中的表達(dá)。CLDN3、CLDN4在按照大體形態(tài)

5、分組中，不同大體形態(tài)的腫瘤組織之間的表達(dá)量均有顯著性差異，均為隆起型的表達(dá)量最高，浸潤(rùn)型最低。在不同分化程度、不同形態(tài)與不同TNM分期組織中，CLDN7在腫瘤組織中的表達(dá)顯著低于癌旁；在按照大體形態(tài)分組中，不同形態(tài)的腫瘤組織之間的表達(dá)量也有顯著差異(p=0.020)，其中，隆起型的表達(dá)量最高0.684(0.432～1.161)。在按照淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移分類中，不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的腫瘤組織之間的CLDN7的表達(dá)量也有顯著差異(p=0.001)

6、，N0[0.398(0.0769～1.141)]>N1[0.262(0、186～0.383)]>N2[0.233(0.179～0.316)]。免疫組化分析結(jié)果顯示CLDN1在腫瘤組織中蛋白表達(dá)量顯著高于癌旁組織，而CLDN7在腫瘤組織中蛋白表達(dá)量顯著低于癌旁組織，結(jié)果與之前mRNA表達(dá)差異總體相符。在分期分析中，癌組織CLDN7在I期與II期中表達(dá)顯著低于癌旁組織，CLDN1則在II期結(jié)腸癌樣本中表達(dá)顯著高于癌旁組織。單核苷酸多態(tài)性分析

7、的結(jié)果，腫瘤患者與正常對(duì)照的結(jié)果顯示CLDN1的rs17501976(-402C/T)基因型頻率與對(duì)照組顯著不同。進(jìn)一步分析顯示，分析顯示，rs17501976(tt對(duì)Ct+CC，p=0.045，OR=0.41，95％CI(0.18-0.91))在隱性遺傳模型中有顯著差異，同時(shí)其TT與TC兩種基因型在病人與正常人中也同樣存在差異(TT對(duì)TC，p=0.035，OR=0.37，95％CI(0.16-0.87))。該多態(tài)性位點(diǎn)是否會(huì)影響CLD

8、N1的表達(dá)需用進(jìn)一步試驗(yàn)分析。 結(jié)論：VEGF受體FLT1基因以及Claudin家族成員CLDN1基因在結(jié)直腸癌中表達(dá)上調(diào)、CLDN3、CLDN4、CLDN7基因在結(jié)直腸癌中表達(dá)下調(diào)，這些基因的表達(dá)上的變化與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。VEGFB的高表達(dá)與結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。CLDN7表達(dá)下調(diào)與腫瘤的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)傾向密切相關(guān)；與結(jié)直腸癌的淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，其下調(diào)的程度可以反映淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的嚴(yán)重程度。CLDN3、 CLDN4