基于一測多評(píng)法對(duì)毛橘紅與光橘紅的質(zhì)量比較研究.pdf

1、目的:
　　在2015年版《中國藥典》基礎(chǔ)上，篩選出質(zhì)量合格的化橘紅藥材樣品，系統(tǒng)建立適用于快速測定化橘紅中5種黃酮類成分含量的一測多評(píng)法，并揭示兩種來源化橘紅（毛橘紅與光橘紅）之間的差異。
　　方法:
　　參考2015年版《中國藥典》要求，首先建立用于一測多評(píng)法質(zhì)量評(píng)價(jià)研究的化橘紅藥材的質(zhì)量控制方法，對(duì)各批供試品進(jìn)行水分、總灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物的含量測定;通過性狀鑒別、顯微鑒別分析毛橘紅與光橘紅樣品的外觀

2、性狀和顯微結(jié)構(gòu)特征差異;采用2015年版《中國藥典》薄層色譜法對(duì)化橘紅藥材進(jìn)行薄層鑒別，并建立一種可有效區(qū)別毛橘紅與光橘紅樣品的薄層色譜法;采用高效液相色譜法建立毛橘紅與光橘紅樣品的HPLC指紋圖譜，進(jìn)行分析比較。通過以上方法，篩選出的合格的化橘紅藥材樣品，建立一測多評(píng)法同時(shí)測定毛橘紅與光橘紅中柚皮苷、新橙皮苷、野漆樹苷、柚皮素、芹菜素5種黃酮類成分的含量，運(yùn)用相關(guān)系數(shù)法對(duì)一測多評(píng)法計(jì)算所得的5種黃酮類成分含量與傳統(tǒng)外標(biāo)法計(jì)算所得的黃酮

3、類成分含量進(jìn)行驗(yàn)證。采用一測多評(píng)法對(duì)毛橘紅與光橘紅藥材進(jìn)行質(zhì)量比較。
　　結(jié)果:
　　1.用于一測多評(píng)法的化橘紅藥材的質(zhì)量控制
　　1.1.理化鑒別
　　31批毛橘紅樣品的水分含量范圍在7.77％～9.81％之間，平均水分含量為8.78％;17批光橘紅樣品的水分含量范圍在7.68％～10.88％之間，平均水分含量為9.46％。31批毛橘紅的總灰分含量范圍在2.77％～4.57％之間，平均含量為3.59％;17批光

4、橘紅的總灰分含量范圍在3.60％～4.88％之間，平均含量為4.19％。31批毛橘紅樣品與17批光橘紅樣品的水分含量均不超過11％，總灰分含量均不超過5.0％，符合2015年版《中國藥典》要求。浸出物含量測定結(jié)果顯示，毛橘紅樣品的水溶性浸出物（熱浸法）含量范圍在36.60％～49.45％之間，平均含量為42.77％;光橘紅樣品的水溶性浸出物（熱浸法）含量范圍在37.91％～48.16％之間，平均含量為43.37％。毛橘紅樣品的乙醇浸出物

5、（熱浸法）含量范圍在20.52％～27.12％之間，平均含量為23.68％。光橘紅樣品的乙醇浸出物（熱浸法）含量范圍為18.27％～28.34％，平均含量為23.85％。
　　1.2.性狀鑒別與顯微鑒別
　　31批毛橘紅表面觀呈黃綠色至深褐色，外果皮密被白色茸毛，其粉末中除了含有光橘紅粉末中可發(fā)現(xiàn)的表皮細(xì)胞、中果皮薄壁細(xì)胞、網(wǎng)紋導(dǎo)管、螺紋導(dǎo)管、草酸鈣方晶外，還含有其特有的非腺毛，橫切面顯微結(jié)構(gòu)中，表皮細(xì)胞類方形，有非腺毛分布

6、，外緣可見1列油室，呈圓形或橢圓形。17批光橘紅表面觀呈黃棕色至深褐色，外果皮光滑無毛，中果皮薄壁細(xì)胞排列較疏松，表皮不含非腺毛，油室較大。
　　1.3.薄層色譜研究
　　薄層色譜法（藥典法）結(jié)果顯示，化橘紅樣品在柚皮苷對(duì)照品相應(yīng)位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)所建立的薄層色譜法，在紫外光(365 nm)下，在Rf=0.35與Rf=0.27處，毛橘紅樣品的乙醇提取部位在相應(yīng)位置上沒有顯示斑點(diǎn)。光橘紅樣品的乙醇提取部位在Rf=

7、0.35處顯示藍(lán)色斑點(diǎn)，部分光橘紅樣品在Rf=0.27處顯示藍(lán)色斑點(diǎn)。
　　1.4.HPLC指紋圖譜研究
　　HPLC指紋圖譜顯示，從毛橘紅與光橘紅樣品共檢出色譜峰24個(gè)，對(duì)其HPLC指紋圖譜進(jìn)行色譜峰匹配，其中21個(gè)為共有峰，8、17號(hào)峰為毛橘紅特有峰，2號(hào)峰為光橘紅特有峰。31批毛橘紅的HPLC指紋圖譜相似度在0.954～0.995之間，17批光橘紅的HPLC指紋圖譜相似度在0.905～0.999之間，相似度均達(dá)到0.9

8、0以上。
　　2.一測多評(píng)法的建立
　　以柚皮苷作為內(nèi)參物，建立新橙皮苷、野漆樹苷、柚皮素、芹菜素的相對(duì)校正因子分別為0.898、1.519、0.313、0.406，RSD＜3.0％。運(yùn)用相關(guān)系數(shù)法對(duì)一測多評(píng)法測定的毛橘紅與光橘紅的5種黃酮類成分進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示，一測多評(píng)法計(jì)算得到的5種黃酮類成分含量結(jié)果與外標(biāo)法計(jì)算得到的5種黃酮類成分含量結(jié)果無顯著差異。
　　3.一測多評(píng)法評(píng)價(jià)毛橘紅與光橘紅藥材質(zhì)量
　　采用

9、一測多評(píng)對(duì)毛橘紅與光橘紅樣品進(jìn)行質(zhì)量比較，結(jié)果顯示，毛橘紅柚皮苷含量在56.321 mg·g-1～274.513 mg·g-1之間，平均含量127.138 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.032 mg·g-1～0.163 mg·g-1之間，平均含量0.085 mg·g-1;野漆樹苷含量在1.307 mg·g-1～14.726 mg·g-1之間，平均含量7.079 mg· g-1;柚皮素含量在0.116mg·g-1～1.162 mg·g-

10、1之間，平均含量0.394 mg·g-1;芹菜素含量在0.018 mg·g-1～0.094 mg·g-1之間，平均含量0.052 mg·g-1。光橘紅柚皮苷含量在28.387 mg·g-1～229.015 mg·g-1之間，平均含量76.085 mg·g-1;新橙皮苷含量在0.040 mg·g-1～0.143mg·g-1之間，平均含量0.078 mg·g-1;野漆樹苷含量在0.857 mg·g-1～5.675 mg·g-1之間，平均含量

11、2.488 mg·g-1;柚皮素含量在0.083 mg·g-1～0.373 mg·g-1之間，平均含量0.194 mg·g-1;芹菜素含量在0.017 mg·g-1～0.124 mg·g-1之間，平均含量0.052 mg·g-1。獨(dú)立t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，毛橘紅與光橘紅的柚皮苷、野漆樹苷、柚皮素成分的含量存在顯著差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.用于一測多評(píng)法的化橘紅藥材的質(zhì)量控制
　　所檢化橘紅樣品的水分含量、總

12、灰分含量、性狀與顯微鑒別、薄層鑒別等，均符合2015年版《中國藥典》要求。初步擬定浸出物檢查項(xiàng)，毛橘紅與光橘紅樣品的水溶性浸出物（熱浸法）不得少于33％，醇溶性浸出物（熱浸法）不得少于18％。本實(shí)驗(yàn)所建立的薄層色譜法，色譜圖斑點(diǎn)清晰、直觀，可有效地區(qū)分毛橘紅與光橘紅。所建HPLC指紋圖譜法可用于毛橘紅與光橘紅藥材來源鑒別，可通過所測樣品的特征峰準(zhǔn)確區(qū)分化橘紅樣品的來源，所測毛橘紅樣品來源于化州柚，光橘紅樣品來源于柚。
　　2.一測

13、多評(píng)法的建立
　　一測多評(píng)法所建立的相對(duì)校正因子準(zhǔn)確、可靠，可用于毛橘紅與光橘紅5種黃酮類成分的含量測定。通過一測多評(píng)法計(jì)算化橘紅中5種黃酮類成分的含量，與傳統(tǒng)外標(biāo)法相比，該方法能在新橙皮苷、野漆樹苷、柚皮素、芹菜素對(duì)照品緊缺的情況下，準(zhǔn)確得到待測成分的含量，可降低實(shí)驗(yàn)成本。
　　3.一測多評(píng)法評(píng)價(jià)毛橘紅與光橘紅藥材質(zhì)量
　　毛橘紅與光橘紅在有效成分上存在差異，毛橘紅的柚皮苷含量是光橘紅柚皮苷含量的近一倍，毛橘紅中野漆