HIV-1感染者抗p24和gp41體液免疫應(yīng)答的特征及流行病學(xué)意義.pdf

1、研究背景:
　　人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)是導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)的病原體。HIV-1的跨膜糖蛋白gp41在HIV-1眾多蛋白中最為保守，能誘導(dǎo)產(chǎn)生多個(gè)中和抗體，是免疫檢測(cè)試劑盒中最為常見(jiàn)的檢測(cè)抗原及疫苗研發(fā)的目標(biāo)。衣殼蛋白p24在病毒蛋白中含量最為豐富，其氨基酸序列在多種亞型中高度保守，也

2、是感染后最早能檢測(cè)到的抗原，使其也成為重要的生物標(biāo)志物。
　　研究發(fā)現(xiàn)在HIV-1感染者體內(nèi)存在體液免疫應(yīng)答模式的轉(zhuǎn)變，提示p24和gp41的免疫優(yōu)勢(shì)表位或能成為區(qū)分不同感染模式的生物標(biāo)志物，對(duì)建立實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法有利用價(jià)值。
　　研究目的:
　　本課題通過(guò)重組表達(dá)的p24、gp41蛋白，合成p24、gp41的系列肽段作為包被抗原，探究與HIV-1感染人群外周血與病毒蛋白或肽段的免疫反應(yīng)特征，探討HIV-1感染者的體液免

3、疫應(yīng)答模式及其特點(diǎn)，分析HIV-1感染者體液免疫應(yīng)答模式與感染者病程進(jìn)展指標(biāo)的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)有使用價(jià)值的特殊生物標(biāo)志物，建立能區(qū)分不同感染時(shí)期的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。
　　研究方法:
　　構(gòu)建p24的重組表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)菌。經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)可溶性重組蛋白并對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化。表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE電泳和間接ELISA分析鑒定其活性。
　　收集不同人群來(lái)源的HIV-1陽(yáng)性血漿樣本，利用商品化試劑盒將樣本區(qū)分為近期感

4、染和長(zhǎng)期感染，觀察不同人群在感染時(shí)期分布上的差異。分別合成3條覆蓋p24和gp41不同區(qū)域的肽段。分析不同人群，不同感染時(shí)期的樣本與重組蛋白及肽段的免疫反應(yīng)特點(diǎn)。
　　分析不同感染時(shí)期的樣本與肽段的免疫應(yīng)答情況，篩選出具有區(qū)分HIV-1不同感染時(shí)期能力的肽段。優(yōu)化反應(yīng)條件，初步建立區(qū)分HIV-1不同感染時(shí)期的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。通過(guò)與兩種商品化試劑盒鑒定結(jié)果的比較，評(píng)價(jià)方法的敏感性和特異性。
　　研究結(jié)果:
　　成功構(gòu)建p

5、24的原核表達(dá)質(zhì)粒并誘導(dǎo)表達(dá)，蛋白電泳與預(yù)期相符，間接ELISA分析顯示p24具有抗原特異性。
　　88.3％(233/264)的樣本不與三個(gè)覆蓋p24主要免疫優(yōu)勢(shì)表位的三個(gè)肽段反應(yīng)，與此形成對(duì)比的是，87.7％(236/269)的樣本至少與一個(gè)gp41的肽段反應(yīng)。隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，HIV-1感染者體內(nèi)gp41-p1特異性抗體滴度逐步上升，感染時(shí)間與gp41-p1的酶免實(shí)驗(yàn)OD值之間的相關(guān)系數(shù)為0.78。
　　將gp41和