mCRC患者初始治療前CEA水平與西妥昔單抗療效相關(guān)性及其機(jī)制探討.pdf

1、本文分為以下幾個部分進(jìn)行探討：
　　第一部分：mCRC患者CEA水平與西妥昔單抗療效分析
　　目的：探討mCRC患者初始治療前血CEA水平與西妥昔單抗治療療效的相關(guān)性。
　　方法：收集并整理2013-2015年在武漢協(xié)和醫(yī)院腫瘤中心接受西妥昔單抗聯(lián)合化療的mCRC患者信息資料，以西妥昔單抗治療前CEA10ng/ml為界分為CEA升高組和CEA正常組，回顧分析mCRC患者臨床病理特征與西妥昔單抗治療療效及生存預(yù)后的關(guān)系。

2、
　　結(jié)果：按照入選標(biāo)準(zhǔn)篩選患者，共納入20例mCRC，其中CEA升高組13例，CEA正常組7例。CEA升高組接受西妥昔單抗治療后疾病控制率（DCR）高于CEA正常組（92％VS28%），組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Fisher精確檢驗(yàn)， P=0.007）；而性別、年齡、腫瘤原發(fā)灶部位、轉(zhuǎn)移范圍與DCR無明顯相關(guān)。CEA升高組總生存期（OS）均值及中位數(shù)（個月）均高于CEA正常組（18.7 VS14.2，18 VS9），組間差異無統(tǒng)計(jì)

3、學(xué)意義（Log rank檢驗(yàn)，P=0.339）；CEA升高組無病生存期（PFS）均值及中位數(shù)（個月）均高于CEA正常組（7.6VS5，7VS0），組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Logrank檢驗(yàn)，P=0.334）。
　　結(jié)論：mCRC患者治療前CEA升高組較CEA正常組在接受西妥昔單抗治療后獲得較好的DCR。比較患者接受西妥昔單抗治療后OS、PFS的均值和中位數(shù)，治療前CEA升高組較CEA正常組均高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　第二部

4、分：EGF對LOVO細(xì)胞增殖的影響及其與CEA表達(dá)相關(guān)性分析
　　目的：觀察EGF對多種CRC細(xì)胞促增殖作用及其與細(xì)胞CEA表達(dá)相關(guān)性。
　　方法：MTT法檢測EGF對6種CRC細(xì)胞系增殖的影響；裸鼠移植瘤模型驗(yàn)證EGF對CRC細(xì)胞的促增殖作用；免疫印跡技術(shù)和實(shí)時PCR分別檢測細(xì)胞CEA在蛋白質(zhì)和mRNA水平的表達(dá)情況；免疫印記技術(shù)檢測EGF刺激CRC細(xì)胞系后，CEA和核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子CEAR表達(dá)水平的變化；免疫組織化學(xué)技術(shù)

5、檢測皮下移植瘤組織CEA的表達(dá)情況；利用siRNA技術(shù)抑制EGFR表達(dá)后，免疫印記檢測其對EGF促進(jìn)細(xì)胞CEA表達(dá)及AKT、ERK磷酸化的影響。
　　結(jié)果：EGF刺激LOVO的增殖效應(yīng)顯著，呈劑量依賴性，且從緊密連接的上皮細(xì)胞樣變?yōu)殡x散的梭形間質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài)，而其它CRC細(xì)胞無明顯增殖效應(yīng)，形態(tài)學(xué)無明顯變化；EGF刺激LOVO皮下移植瘤增殖效應(yīng)顯著，呈時間及劑量依賴性，EGF濃度為500μg/kg/d時達(dá)到最大增殖效應(yīng)；僅LOVO細(xì)

6、胞在mRNA和蛋白質(zhì)水平均有CEA高表達(dá)；EGF能促進(jìn)LOVO細(xì)胞CEA表達(dá)上調(diào)，并伴有CEAR表達(dá)下調(diào)；EGF實(shí)驗(yàn)組皮下移植瘤組織CEA表達(dá)量明顯高于對照組；抑制LOVO細(xì)胞EGFR的表達(dá)后，可阻斷EGF對LOVO細(xì)胞CEA表達(dá)的促進(jìn)作用及AKT、ERK的磷酸化激活。
　　結(jié)論：EGF僅對在mRNA和蛋白質(zhì)水平均有CEA高表達(dá)的LOVO細(xì)胞有明顯的促增殖作用，并伴隨間質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài)改變，而對SW620、SW480、HT29、HCT

7、116和CACO2細(xì)胞的增殖及形態(tài)學(xué)改變無明顯影響；EGF能促進(jìn)LOVO細(xì)胞CEA表達(dá)，并伴有CEAR下調(diào)；EGF通過EGFR誘導(dǎo)LOVO細(xì)胞AKT、ERK磷酸化和促CEA高表達(dá)。
　　第三部分：EGF對LOVO細(xì)胞增殖的影響及其與RAS、EGFR狀態(tài)相關(guān)性分析
　　目的：觀察EGF對CRC細(xì)胞促增殖作用的大小及其與細(xì)胞RAS突變和EGFR表達(dá)的相關(guān)性。
　　方法：對6種CRC細(xì)胞進(jìn)行RAS和BRAF基因測序；予以EG

8、F刺激后，免疫印記檢測CRC細(xì)胞的AKT、ERK磷酸化狀態(tài)；檢測6種CRC細(xì)胞EGFR表達(dá)狀態(tài)。
　　結(jié)果：LOVO和HCT116為KRAS G13D突變，SW620和SW480為KRAS G12V突變，HT29和CACO2均無RAS、BRAF突變；除SW620外，LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2細(xì)胞均有EGFR高表達(dá)，而且接受EGF刺激后，LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2細(xì)胞AKT