豆類絲核菌培養(yǎng)液中苦馬豆素的分離純化.pdf

1、[目的]:本試驗(yàn)旨在探索出一條由豆類絲核菌培養(yǎng)液中提取苦馬豆素的有效方法，從而為苦馬豆素分離純化開拓新的途徑。 [方法]:豆類絲核菌定期用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)移接，使其保持良好的生長(zhǎng)力。其培養(yǎng)液是用改良的Czapek's培養(yǎng)基培養(yǎng)特定的豆類絲核菌菌株所得。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中使用薄層層析法(TLC)進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。最終結(jié)果使用氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。 不同的方法分離純化豆類絲核菌培養(yǎng)液中的苦馬豆素：所用五種方法總體上使用氯仿、

2、正丁醇萃取；無(wú)水乙醇索氏抽提、洗脫劑溶解：氨性氯仿溶解；硅膠柱層析分離等方法得到粗品，粗品經(jīng)過(guò)減壓升華得到最終樣品。具體方法如下： 方法一：將處理好并密封保存的豆類絲核菌的培養(yǎng)液(pH<4)過(guò)濾，濾液用氨水調(diào)節(jié)pH>9，待沉淀完全后過(guò)濾。濾液蒸成浸膏狀用無(wú)水乙醇索氏抽提8～12h，抽提液回收乙醇后，水溶液調(diào)堿用正丁醇萃取，其有機(jī)相用稀酸水(10％HCl)反萃，保留水相。水相調(diào)pH>9后蒸干，得到淡黃色晶體。將其放入小柱子或襯有濾

3、紙的漏斗中，用無(wú)水乙醇洗脫，洗脫液蒸干后得到的淡黃色晶體經(jīng)過(guò)減壓升華后得到白色粉末狀物質(zhì)。 方法二：將處理好并密封保存的豆類絲核菌的培養(yǎng)液(pH<4)過(guò)濾，濾液用氨水調(diào)節(jié)pH>9，待沉淀完全后過(guò)濾。濾液用正丁醇萃取，其有機(jī)相用稀酸水(10％HCl)反萃，保留水相。水相調(diào)pH>9蒸干后用無(wú)水乙醇浸泡24h，浸泡液蒸干后減壓升華，得到白色粉末狀物質(zhì)。 方法三：將處理好并密封保存的豆類絲核菌的培養(yǎng)液(pH<4)過(guò)濾，濾液依次用

4、氯仿和正丁醇萃取，保留水相。水相用NaOH調(diào)pH>9蒸干，蒸干后所得浸膏用無(wú)水乙醇索氏抽提8～12h，抽體液蒸干后上硅膠柱，用洗脫劑(氯仿：甲醇：氨水：水=70:26:2:2)洗脫，每5ml一管。TLC實(shí)時(shí)檢測(cè)，合并相同組分。蒸干后減壓升華。 方法四：將方法一升華后所剩物質(zhì)溶于水并重新用NaOH調(diào)pH>9，蒸干后再用氨性氯仿溶解，溶液蒸干后減壓升華，得到黃色膏體狀物質(zhì)。 方法五：將處理好并密封保存的豆類絲核菌的培養(yǎng)液(p