鼻咽癌中LMP1對(duì)miRNA-200家族及ZEB1調(diào)控作用研究.pdf

1、目的:檢測(cè)鼻咽癌中LMP1、miR-200家族，ZEB1和E-cadherin等因子表達(dá)，并探討它們之間的調(diào)控關(guān)系，研究其參與NPC侵襲轉(zhuǎn)移可能的相關(guān)分子機(jī)制，對(duì)控制和防治鼻咽癌具有重要意義。
　　方法:1.免疫組織化學(xué)方法研究ZEB1、LMP1和E-cadherin在NPC組織和鼻咽炎性組織中蛋白表達(dá)水平，并分析三種蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性
　　2.使用pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1，CNE2

2、進(jìn)行轉(zhuǎn)染，并使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)技術(shù)及免疫印跡法(Western Blot，WB)檢測(cè)轉(zhuǎn)染pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒前、后LMP1表達(dá)情況。
　　3.qRT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染和非轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中miR-200家族、LMP1、ZEB1和E-cadherin mRNA表達(dá)水平。WB法研究LMP1、ZEB1和E-cadherin蛋白在轉(zhuǎn)染pIRES

3、2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒前、后CNE1，CNE2細(xì)胞系中的表達(dá)水平。
　　4.用SPSS16.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)（方差齊）或者校正t檢驗(yàn)（方差不齊）來(lái)比較兩組間差異，計(jì)數(shù)資料率的比較用Fisher確切概率法（總例數(shù)＜40例），用Pearson相關(guān)分析或者Spearman等級(jí)相關(guān)分析做相關(guān)性分析。P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果: L

4、MP1、ZEB1及E-cadherin在鼻咽癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為53.8％、71.8％，20.5％，其中LMP1、ZEB1在鼻咽癌組織中的陽(yáng)性率均明顯高于鼻咽炎性組織，組間比較有顯著差異(p＜0.05)。分析NPC組織中LMP1與ZEB1和E-cadherin蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性，結(jié)果顯示:LMP1和ZEB1的蛋白表達(dá)成正相關(guān)(r=0.563，p＜0.05)，與E-cadherin的蛋白表達(dá)成負(fù)相關(guān)(r=-0.421，p＜0.05)，

5、而ZEB1的表達(dá)與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)(r=-0.387，p＜0.05)。
　　2.轉(zhuǎn)染結(jié)果:轉(zhuǎn)染后CNE1，CNE2 qRT-PCR及WB結(jié)果均表明LMP1表達(dá)有差異，說(shuō)明轉(zhuǎn)染成功。
　　3.轉(zhuǎn)染和非轉(zhuǎn)染細(xì)胞株qRT-PCR檢測(cè)檢驗(yàn)結(jié)果:①LMP1、ZEB1mRNA在轉(zhuǎn)染pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒的CNE1和CNE2中的表達(dá)水平均高于相應(yīng)非轉(zhuǎn)染NPC細(xì)胞（均p＜0.05）;E-cadherin

6、mRNA在轉(zhuǎn)染組CNE1和CNE2中表達(dá)均下調(diào)（均p＜0.05）。②瞬轉(zhuǎn)pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒的CNE1細(xì)胞中miR-200a，miR-200c和miR-141的表達(dá)水平低于對(duì)照組，其中miR-141下調(diào)明顯;miR-200b的表達(dá)水平高于對(duì)照組，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均p＜0.05）。③瞬轉(zhuǎn)pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒的CNE2細(xì)胞中miR-200a、miR-200c和miR-141的表達(dá)水

7、平均低于對(duì)照組，其中miR-141下調(diào)最明顯，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均p＜0.05）。
　　4.轉(zhuǎn)染和非轉(zhuǎn)染細(xì)胞株WB法檢測(cè)檢驗(yàn)結(jié)果:CNE1和CNE2細(xì)胞轉(zhuǎn)染pIRES2-Zs-Green1-LMP1質(zhì)粒后，LMP1與ZEB1的表達(dá)均上調(diào)，其中LMP1上調(diào)明顯，E-cadherin的表達(dá)均下調(diào)，組間比較有顯著差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.鼻咽癌組織中LMP1和ZEB1的蛋白表達(dá)成正相關(guān)，而ZEB1的表