中碳鏈脂肪酸對人肝細胞凋亡及炎癥應答的影響.pdf

1、中碳鏈脂肪酸（Medium chain fatty acids，MCFA）由于碳鏈短，分子小，比長鏈脂肪酸（Long chain fatty acids，LCFA）更易于吸收且供能迅速，使得其被廣泛研究。但是關于MCFA干預細胞后的炎癥應答方面的研究很少，因此本文以人肝細胞為作用對象，用不同碳鏈長度的脂肪酸作用后，分析脂肪酸對人肝細胞的凋亡及炎癥應答影響。
　　采用MTT（噻唑藍）和LDH（lactate dehydrogenas

2、e，乳酸脫氫酶）實驗測定脂肪酸對人肝細胞和BALB/C小鼠的肝、脾細胞的增殖活性的影響，確定最適作用濃度；用倒置熒光顯微鏡和流式細胞術檢測脂肪酸對細胞凋亡的影響；用SOD（superoxide dismutase，超氧化物歧化酶）和MDA（ malonaldehyde，丙二醛）實驗來測定脂肪酸對細胞的氧化損傷；HPLC（High Performance Liquid Chromatography，高效液相色譜法）觀測脂肪酸對細胞胞內(nèi)蛋白

3、的影響；隨后采用 LPS（lipopolysaccharide，脂多糖）作用于細胞作為陽性對照組，用 q-PCR（實時熒光定量），ELISA（酶聯(lián)免疫）和WB（Western Blotting，蛋白印跡）來分析脂肪酸作用后細胞在不同水平的經(jīng)典的炎癥因子的變化（ TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-8、IL-6）。
　　結(jié)果表明：200μM的脂肪酸作用肝細胞24小時后細胞依舊保持較高的細胞活力，且與空白對照組相比無顯著氧化損傷

4、，其中 L C FA引起的細胞凋亡比MCFA更為強烈，胞內(nèi)蛋白種類和數(shù)量也發(fā)生更大的變化；LPS有效地引起了細胞的炎癥應激，使得細胞因子在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平都顯著高于空白對照組，而脂肪酸則無如此明顯；LCFA上調(diào)TNF-α，MCP-1，IL-1β下調(diào)IL-8，IL-6在細胞上清的分泌，且程度都大于MCFA，這一變化在mRNA水平相應地觀察到，而蛋白水平也有所反映。上述說明在對人肝細胞進行相同的干預下，與LCFA相比，MCFA呈現(xiàn)出更為溫和的