組織工程神經(jīng)修復(fù)周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不舍為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：立：! 立垂 ．日 期：蘭：! ≤．! 呈．壟組織工程神經(jīng)修復(fù)周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成

2、的實(shí)驗(yàn)研究 中文摘要組織工程神經(jīng)修復(fù)周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的：運(yùn)用形態(tài)學(xué)觀察方法及基因芯片檢測(cè)的大數(shù)據(jù)分析方法，觀察和分析體外構(gòu)建的組織T 程神經(jīng)體內(nèi)修復(fù)周圍神經(jīng)缺損過程中血管生成的自然生物學(xué)過程，并研究和探討其血管生成關(guān)鍵調(diào)控基因和內(nèi)在分子調(diào)控機(jī)制。方法：1 ．體外構(gòu)建組織工程神經(jīng)。成功制備冷凍干燥的殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管的基礎(chǔ)上；以大鼠皮膚來源祖細(xì)胞( S K P s ) 分化的旋萬細(xì)胞( S K P —S C s

3、) 為支持細(xì)胞，內(nèi)置絲素纖維的殼聚糖導(dǎo)管為支架材料，在旋轉(zhuǎn)灌注式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)( R C C S ) 中體外構(gòu)建組織工程神經(jīng)。構(gòu)建好的組織工程神經(jīng)用生理鹽水( N S ) 漂洗兩次，于N S 中保存?zhèn)溆谩? ．制備坐骨神經(jīng)缺損模型。S P F 級(jí)雌性S D 大鼠隨機(jī)分為4 組：T E N G ( 組織工程神經(jīng)) 組，A u t o g r a f t ( 自體神經(jīng)) 組，S c a f f o l d ( 殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管) 組，S h a

4、 m ( 假手術(shù)) 組。實(shí)驗(yàn)設(shè)1 d 、4 d 、1 w 、2 w 、3 w 、4 w 、8 w 和1 2 w 共8 個(gè)時(shí)間點(diǎn)。常規(guī)手術(shù)制備大鼠坐骨神經(jīng)1 0 m m 缺損模型。3 ．體視顯微鏡觀察和拍照。動(dòng)物麻醉后，游離并充分暴露橋接的組織工程神經(jīng)或白體神經(jīng)( 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)：T E N G 組n = 3 ，A u t o g r a f t 組n = 3 ) 。組織工程神經(jīng)或自體神經(jīng)整體置于體視顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行觀察，聚焦其表面血管進(jìn)行拍

5、照。4 ．H E 染色和拍照。體視顯微鏡拍照完畢后，取出手術(shù)側(cè)組織工程神經(jīng)及橋接段自體神經(jīng)( 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)：T E N G 組n = 3 ，A u t o g r a f t 組n = 3 ) 。動(dòng)物標(biāo)本經(jīng)過固定、切片，進(jìn)行H E 染色。光鏡下對(duì)組織工程神經(jīng)和自體神經(jīng)中段的內(nèi)部血管進(jìn)行觀察和拍照。5 ．M i c r o ．C T 掃描、血管重建及參數(shù)分析。動(dòng)物麻醉后，進(jìn)行M I C R O F I L 造影劑灌注( 術(shù)后4 w ：T E