骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)控肝星狀細(xì)胞RhoA、p27的表達(dá).pdf

1、目的：研究體外大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)對肝星狀細(xì)胞(HSCs)RhoA信號(hào)因子及其細(xì)胞周期調(diào)控因子p27表達(dá)的影響，探討MSCs調(diào)控HSCs細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)換機(jī)制。
　　 方法：貼壁篩選法培養(yǎng)、純化SD大鼠MSCs，傳代至第4代使用；大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)系及纖維原細(xì)胞系凍融后傳代使用。應(yīng)用6孔塑料細(xì)胞培養(yǎng)盒，每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下雙層細(xì)胞共培養(yǎng)體系，常規(guī)培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分3組：空

2、白對照組；陰性對照組；MSCs實(shí)驗(yàn)組.用WST-8法對肝星狀細(xì)胞增殖率進(jìn)行測定；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期；RT-PCR、Western blot檢測MSCs與HSCs共培養(yǎng)后HSCs內(nèi)RhoA，p27 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)HSCs與MSCs共培養(yǎng)24h后，HSCs表現(xiàn)明顯增殖抑制(P＜0.01)，且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性.MSCs試驗(yàn)組與空白對照組、陰性對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01；P＜0.01)。(2)共

3、培養(yǎng)12h后，MSCs可阻滯HSCs由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)換，使G0/G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，與空白對照組、陰性對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(3)共培養(yǎng)12h后，MSCs實(shí)驗(yàn)組RhoA mRNA表達(dá)與空白對照組、陰性對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05；P＜0.01)，隨時(shí)間的延長呈遞減趨勢；共培養(yǎng)后，MSCs實(shí)驗(yàn)組p27 mRNA表達(dá)與空白對照組、陰性對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 (4)共培養(yǎng)12

4、h后，MSCs實(shí)驗(yàn)組RhoA蛋白表達(dá)與空白對照組、陰性對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01；P＜0.01)，隨時(shí)間的延長呈遞減趨勢；共培養(yǎng)12h后，MSCs實(shí)驗(yàn)組p27蛋白與空白對照組、陰性對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01；P＜0.01)，隨時(shí)間的延長呈遞增趨勢。(5)相關(guān)性分析顯示：RhoA與p27 mRNA的表達(dá)無明顯相關(guān)(r=-0.105)；RhoA與p27蛋白的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.943，P＜0.01)。