EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞永生細(xì)胞株長(zhǎng)期傳代后的遺傳穩(wěn)定性.pdf

1、用EB病毒轉(zhuǎn)化外周血B淋巴細(xì)胞建立的永生細(xì)胞株，因其可以在傳代培養(yǎng)的條件下，源源不斷地為各種遺傳性疾病、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)研究提供DNA和細(xì)胞而在基礎(chǔ)生命科學(xué)研究中受到重視.本實(shí)驗(yàn)的目的是檢測(cè)傳代培養(yǎng)的永生細(xì)胞株在長(zhǎng)期傳代的過(guò)程中細(xì)胞和分子遺傳學(xué)方面能否保持穩(wěn)定，這關(guān)系到評(píng)價(jià)永生細(xì)胞株提供DNA的科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要問(wèn)題。 本實(shí)驗(yàn)從染色體、高突變微衛(wèi)星位點(diǎn)及端粒酶活性三方面選取10株永生細(xì)胞株對(duì)永生細(xì)胞株的細(xì)胞和分子遺傳

2、學(xué)特征進(jìn)行檢測(cè)。在染色體方面，細(xì)胞株每隔10代，即10代、20代……時(shí)，取出進(jìn)行染色體標(biāo)本的制備，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞株分裂相及亞二倍體、超二倍體和多倍體的發(fā)生率。在微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測(cè)方面，從核基因組和線粒體基因組上分別選取突變率>0.09％的13個(gè)位點(diǎn)及D-loop區(qū)高突變的2個(gè)位點(diǎn)，對(duì)細(xì)胞株的血樣及每隔10代取出的細(xì)胞抽提的DNA用PCR擴(kuò)增進(jìn)行變性后，以聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)縱向比較，檢測(cè)在這些高突變的位點(diǎn)區(qū)域是否有突變的發(fā)生。在細(xì)胞株端粒酶活性

3、檢測(cè)方面，將10株細(xì)胞株在培養(yǎng)過(guò)程中的不同代次取出，以Hela細(xì)胞株的細(xì)胞提取液作為端粒酶實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行端粒酶活性檢測(cè)。 檢測(cè)結(jié)果表明，本研究室采用EBV轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞建立的永生細(xì)胞株在傳代培養(yǎng)的30代之內(nèi)遺傳特征是穩(wěn)定的。繼續(xù)傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞株的生長(zhǎng)速度減慢，細(xì)胞分裂相減少，其中細(xì)胞株Yao56和Yao43分別在30代和60代后分裂相出現(xiàn)多倍體，而Yao225和Yao230在50代后死亡。10株細(xì)胞株中，Yao262傳至